【摘 要】
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目的 :从全人源单链抗体文库中筛选并鉴定抗金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-HL)单链抗体。方法 :IPTG低温诱导α-HL融合蛋白表达并纯化鉴定;采用噬菌体展示技术从单链抗体文库中
【机 构】
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西南医科大学药学院药理学系; 西南医科大学基础医学院;
【基金项目】
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四川省科技厅-西南医科大联合项目(14ZC0021);泸州市-西南医科大学联合项目(2017LZXNYD-T06);四川省教育厅创新团队项目(16TD0022)
论文部分内容阅读
目的 :从全人源单链抗体文库中筛选并鉴定抗金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-HL)单链抗体。方法 :IPTG低温诱导α-HL融合蛋白表达并纯化鉴定;采用噬菌体展示技术从单链抗体文库中筛选抗α-HL全人源单链抗体(scFv)。将筛选并测序鉴定正确的15株scFvs插入pLZ16载体进行表达验证和ELISA鉴定。结果 :表达纯化的α-HL融合蛋白为可溶性蛋白,大小约为90kDa。采用表达的α-HL融合蛋白作为抗原,经过4轮噬菌体展示筛选,ELISA结果显示大约有34%的scFvs与α-HL具有结合特性。将与α-HL结合良好且序列正确的15株scFvs插入pLZ16载体中进行可溶性表达后,经Western blot验证正确;ELISA鉴定结果显示:scFvs与购买的α-HL(Sigma,USA)、金黄色葡萄球菌都具有较高的结合活性且对金黄色葡萄球菌特异,与白色葡萄球菌无交叉反应。结论 :成功筛选到抗α-HL全人源单链抗体。
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