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目的:构建靶向ATRX (alpha thalassemia/mental retardation syndrome X-linked)基因RNAi的慢病毒载体,慢病毒感染H460细胞后建立稳定敲除ATRX的细胞模型,探讨辐射敏感性增强的作用和机制。 方法:应用分子生物学技术构建3个RNAi慢病毒表达载体pGIZ-shATRX-1,pGIZ-shATRX-2和pGIZ-shATRX-3,包装慢病毒后感染H460细胞,利用Westem blot和免疫荧光检测ATRX蛋白表达;采用克隆形成实验检测存活分数(SF)的变化,评估放射敏感性;采用AnnexinV-FITC试剂盒流式细胞术检测细胞凋亡;采用免疫荧光检测4 Gy照射后γH2AX和Rad51焦点形成;同时采用Western blot检测γH2AX和Rad51蛋白的表达变化。