【摘 要】
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肌肉生长抑制素Myostatin基因(MSTN)是一种抑制骨骼肌生长发育的生长因子,为TGF-β超家族成员.其不仅在骨骼肌中表达,在肝脏,乳腺组织,脂肪组织等器官也有少量存在.现已有研
【机 构】
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复旦大学生命科学学院遗传学研究所,遗传工程国家重点实验室,上海200433
【出 处】
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中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会
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肌肉生长抑制素Myostatin基因(MSTN)是一种抑制骨骼肌生长发育的生长因子,为TGF-β超家族成员.其不仅在骨骼肌中表达,在肝脏,乳腺组织,脂肪组织等器官也有少量存在.现已有研究表明MSTN参与机体蛋白质、糖类以及脂肪等物质代谢的调节.本课题准备从动物水平上研究了MSTN与肝脏脂肪代谢之间的关系.首先利用TALEN方法构建了MSTN基因突变小鼠模型,并利用HRM方法对突变的效率进行快速检测.同时利用HRM对TALEN敲除细胞、小鼠的效率进行检测以及对构建的动物模型进行筛选,结合测序,表明HRM在突变的大量筛选检测方面非常方便有效,节约了大量时间与成本.结果建立了HRM的基因突变检测快速方法.MSTN TALEN质粒转染细胞以及小鼠尾静脉快充检测突变效率分别约为20％和5％.TALEN RNA注射单细胞期小鼠受精卵150枚,移植入假孕母鼠代孕,最后共产子45只,出生率为30％.其中,6只小鼠在MSTN基因靶标位置发生基因突变,基因编辑效率为13.3％,且基因突变可以稳定遗传,在第三代时已经得到突变纯合子.在高脂饮食一个月左右,杂合子与突变纯合子肌肉发达程度与野生型小鼠相比均有增加,且突变纯合子更明显.MSTN基因敲除小鼠的肌肉与正常小鼠相比超常发达,TALEN系统可以用于高效,快速的构建MSTN-/-小鼠模型,HRM方法可用于突变快速检测,为进一步研究MSTN在脂代谢作用提供了动物模型。
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