小麦黄花叶病是冬小麦上重要的病毒病害之一,严重影响小麦的产量和品质。小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)是马铃薯Y病毒科病毒(Potyviridae)大麦黄花叶病毒属(Bymovirus)成员之一,由土壤进行传播。在我国江苏、河南、安徽、山东、陕西、湖北、四川等省均有分布,并且呈逐年蔓延趋势。WYMV有两条正义的RNA链组成,RNA2全长3 656个核苷酸,经蛋白酶切割后产生P1、P2两个成熟蛋白。目前,关于WYMV RNA2基因功能的研究较少对其编码的蛋白功能也只是推测,已知与马铃薯Y病毒属成员HC-Pro的中心区域和N端区域有许多共有的保守区域和位点,但这些保守序列在蛋白功能方面的作用仍不完全清楚。目前有关P1蛋白在病毒侵染、复制、传播、以及寄主互作中的作用还未报道。为了筛选与WYMV P1(Wheat yellow mosaic virus P1 protein)互作的小麦蛋白并验证其互作。本研究的主要结果如下:根据GenBank公布的WYMV-P1的基因序列设计一对特异性引物,用感染WYMV的小麦为材料提取小麦总RNA后反转录成cDNA,以cDNA为模板获得P1序列,构建诱饵载体PGBKT7-P1。利用酵母双杂交从小麦cDNA文库中筛选出8个小麦候选蛋白,将筛选到的候选蛋白与诱饵载体PGBKT7-P1共转到酵母Y2HGold中初步验证这些候选蛋白与WYMV-P1互作。用Westen检测诱饵载体PGBKT7-P1能否在酵母Y2HGold中正常表达。从筛选出的小麦蛋白中选取2个即小麦叶绿体Rubisco(Ribulose bisphosphate carboxylase oxygenase)大亚基命名为RbcL,Rubisco小亚基命名为RbcS,设计引物,扩出全长,构建重组载体与P1重组载体共转酵母Y2HGold中验证RbcL,RbcS和P1的互作关系。研究结果表明:酵母双杂交初步验证结果表明利用酵母双杂交筛选到的8个小麦候选蛋白均与WYMV-P1互作;Westen检测结果显示PGBKT7-P1诱饵载体能正常在酵母Y2HGold中表达;初步从cDNA文库中筛选出来的RbcS扩出全长后存在互作与P1存在互作。