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研究背景:肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。研究表明,肝癌细胞高表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3),与肝癌的生长和迁移密切相关。肝癌的免疫抑制性微环境(包括PD-1、PD-L1等免疫抑制分子高表达)使肿瘤浸润的免疫细胞处于功能抑制或耗竭的状态,促进肿瘤的生长和免疫逃逸。因此,促进免疫系统活化、逆转肿瘤微环境免疫抑制状态对于抑制的肿瘤生长十分必要。目的:我们设计了3p-GPC-3 siRNA,一方面通过沉默GPC-3的表达,抑制肝癌细胞的增殖,另一方面通过识别三磷酸基团活化RIG-Ⅰ信号通路,促进Ⅰ型干扰素的产生,进而激活免疫应答;同时联合抗PD-1抗体阻断免疫负调分子,以为肝癌的免疫治疗提供新的思路和策略。方法:转染3p-GPC-3 siRNA至小鼠肝癌细胞系Hepa1-6细胞,观察GPC-3沉默效果;MTT检测Hepa1-6细胞的增殖,RT-PCR、免疫荧光检测增殖相关分子Ki-67的表达;Annexin V-PI染色检测Hepa1-6细胞凋亡,RT-PCR和Western-blot检测凋亡相关基因的表达;RT-PCR和ELISA分别检测IFN-Ⅰ基因的表达和蛋白分泌水平;利用C57BI/6J小鼠建立皮下荷瘤模型,给予3p-GPC-3 siRNA和anti-PD-1联合治疗,观察肿瘤生长情况和免疫细胞活化水平。结果:3p-GPC-3 siRNA可有效沉默肝癌细胞GPC-3的表达;抑制Hepa1-6细胞的增殖,降低Ki67的表达;促进细胞的凋亡,降低抗凋亡基因BCI-2和BCL-XL的表达,诱导促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达;促进RIG-Ⅰ信号通路的活化和Ⅰ型IFN的分泌;体内结果显示,3p-GPC-3 siRNA单独治疗组及联合anti-PD-1抗体治疗组均能够显著抑制皮下肿瘤的生长,刺激IFN-Ⅰ的分泌,促进脾脏和肿瘤浸润淋巴细胞的活化。结论:双功能3p-GPC-3 siRNA联合anti-PD-1抗体,一方面通过靶向沉默GPC-3抑制肿瘤细胞增殖,一方面激活机体天然免疫应答和获得性免疫应答发挥对肝癌的治疗作用。