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目的:建立SV40T胃壁细胞特异性表达转基因小鼠,为胃癌发病机制的研究提供动物模型。
方法:将胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV中的3.8kb H+/K+ATPase β promoter/SV40T基因片段 酶切回收,利用显微注射法制备转基因小鼠,PCR和Southern blotting 检测阳性转基因小鼠并建系繁殖,免疫组织化学检测基因的特异性表达。
结果:将422枚经显微注射后的受精卵移植到16 只假孕雌鼠输卵管,共生出77只仔鼠,移植成功率为18.2%(77/422)。在出生的77只仔鼠中,2 #、4 #、8 #、16 #、24 #、51 #、57 #、61 #、68 #、73 # 共10个品系经PCR检测为阳性首建鼠。除68 # 不育外,其他9个品系首建鼠共生出99只 F1代鼠,经PCR和Southern blotting 检测发现31只阳性鼠,阳性率为31.3%(31/99)。免疫组织化学检测 F1代阳性鼠均仅在胃组织中有SV40T基因的表达,而在心、肝、肾、肺、肠、骨骼肌、睾丸等组织器官中均不表达。
结论:建立了胃壁细胞特异性表达SV40T基因转基因小鼠动物模型。