背景:NK细胞是机体免疫系统杀伤肿瘤的一个重要组成部分,且因为NK细胞不依赖于抗原刺激,就可以杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞,具有广谱抗肿瘤细胞作用。因此获得高纯度、高杀伤活性的NK细胞是细胞治疗领域的一个亟待解决的难题。目的:建立从PBMC中体外高效扩增高纯度NK细胞的技术方法。方法:采用抗体及细胞因子联合刺激和诱导PBMC,高效扩增NK细胞;流式细胞术分析表面活化型和抑制性受体的表达情况、及杀伤活性相关的细胞因子分泌情况;51Cr释放实验检测对肿瘤细胞的体外杀伤活性;小鼠卵巢癌嵌合模型评估NK细胞体内回输及抗肿瘤治疗效果。结果:从50 ml健康志愿者外周血中分离出PBMC,经由NK扩增混合试剂的刺激和诱导,体外培养14~21 d,NK细胞可平均扩增500倍左右,纯度60%~80%,数量达1.5×109。扩增得到的NK细胞高表达NKG2D、NKp30、NKp46等活化性受体,及IFN-γ、Granzyme B、Perforin等杀伤因子,提示扩增得到的NK细胞具有较强的活性。51Cr释放体外杀伤实验结果显示,NK细胞对白血病细胞系K562和卵巢癌细胞系Ho8910有极高的杀伤活性。采用人鼠卵巢癌嵌合模型对其体内抗肿瘤治疗效果研究显示,治疗组的小鼠生存期与对照组相比显著延长。结论:本研究建立了一种可高效体外扩增高纯度、高杀伤活性的NK细胞体外扩增方法,获得的NK细胞具有显著的抗卵巢癌作用。