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[目的]建立人胚胎干细胞向心肌细胞诱导分化的方法,应用诱导分化的心肌细胞检测化合物的心肌细胞毒性.[材料和方法]采用贴壁培养诱导法：按无饲养层培养法培养的人胚胎干细胞培养至临界分化状态,用传代工作液将其消化成单细胞,离心后接种于96孔板中,再次培养至临界分化状态,使用人心肌分化试剂盒(北京赛贝生物技术有限公司)进行心肌细胞诱导分化,待绝大部分分化细胞出现自发性搏动后,采用单克隆鼠抗人横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α)和单克隆鼠抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTnⅠ)为一抗的免疫细胞化学方法对分化成的心肌细胞进行鉴定.心肌细胞鉴定成功后,进行化合物毒性检测.设立对照组、DMSO组(体积分数：0.1％)、烯啶虫胺(以体积分数为0.1％的DMSO溶解)5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL和0.15625 mg/mL组,染毒24 h后,进行如下检测：①免疫细胞化学染色,观察细胞胞质阳性染色情况.随机选取视野中的100个细胞,计算胞质棕色染色细胞数占此100个细胞的比例,计为心肌细胞分化率；②同批次培养的另一块96孔板进行相同处理后,MTT法检测细胞存活率.以上试验均重复三次.[结果]心肌细胞免疫细胞化学染色结果：①鼠抗人横纹肌辅肌动蛋白α为一抗的心肌细胞分化率为95.2％±4.8％,鼠抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ为一抗的心肌细胞分化率为96.1％±3.6％；②化合物毒性检测结果：烯啶虫胺5mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL和0.15625 mg/mL染毒心肌细胞24 h,免疫细胞化学法检测结果显示胞质棕色染色细胞数明显减少,MTT法检测心肌细胞存活率(以对照组为100％)分别为：DMSO组：98.5％±2.8％；烯啶虫胺5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL和0.15625 mg/mL组分别为10.3％±1.9％、12.2％±2.5％、13.1％±3.8％、24.3％±5.1％、28.5％±4.2％和29.1％±6.8％,与对照组相比,均显著减小(p＜0.0D.[结论]①本试验诱导分化的心肌细胞鉴定合格,成活率高.②烯啶虫胺5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL和0.15625 mg/mL染毒心肌细胞24 h,产生明显的人心肌细胞毒性.其机制有待进一步分析.