【摘 要】
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目的:构建pegfpN1-BDNF真核表达载体,为体外构建基因工程细胞奠定基础。 方法:RT-PCR扩增人胚胎脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)基因片段,将基因片段与pegfpNl质粒连接制成重
【机 构】
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中南大学耳科研究所、中南大学湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科
【出 处】
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第十二届中南六省暨2010年海南省耳鼻咽喉头颈外科会议
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目的:构建pegfpN1-BDNF真核表达载体,为体外构建基因工程细胞奠定基础。
方法:RT-PCR扩增人胚胎脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)基因片段,将基因片段与pegfpNl质粒连接制成重组质粒。转化、筛选及扩增重组质粒,用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切分析鉴定BDNF是否插入重组质粒。小量提取重组质粒后进行测序分析,将酶切检测和测序正确的pegfpN1-BDNF重组质粒用QIAGEN-TIP100大量提取。
结果:经酶切鉴定,成功地将BDNF与pegfpN1质粒连接,构建我们需要的pegfpN1-BDNF重组质粒。
结论:成功构建了pegfpN1-BDNF重组真核表达载体,为体外实验做好准备。
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