【摘 要】
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随着临床上白念珠菌感染率和致死率的不断上升,以及菌株耐药性问题的日益突出,影响白念珠菌毒力及耐药性的关键因子成为目前的研究热点.内质网在真菌细胞分泌蛋白、膜蛋
【机 构】
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南开大学微生物学系,分子微生物学与技术教育部重点实验室,天津 300071
【出 处】
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中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会
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随着临床上白念珠菌感染率和致死率的不断上升,以及菌株耐药性问题的日益突出,影响白念珠菌毒力及耐药性的关键因子成为目前的研究热点.内质网在真菌细胞分泌蛋白、膜蛋白、膜脂及细胞壁的合成、细胞极性生长等过程中均发挥重要作用,而内质网的钙稳态是内质网功能得以正常发挥的基础.在酿酒酵母中,内质网膜P-型ATPase Cod1/Spf1对内质网钙稳态的维持起重要作用,该蛋白的缺失干扰内质网的功能,引起细胞UPR(非折叠蛋白应答)的组成型激活.我们通过Blast分析,在白念珠菌基因库中搜索到了酿酒酵母Cod1/Spf1的同源蛋白,将其命名为CaCod1.TMHMM分析表明,该蛋白是一个具有10个跨膜区的膜蛋白.我们采用两步同源重组法敲除CaCod1,并通过PCR及Southern b1otting技术对敲除菌株CaCod1-/-进行了验证；采用棋盘法对其进行药物敏感性测定,发现与野生型菌株相比,CaCod1-/-菌株对氟康唑、潮霉素B及EGTA等均表现出高度敏感.同时,我们采用一系列菌丝诱导条件,研究CaCod1缺失对白念珠菌菌丝型生长的影响,发现在血清诱导、SLAD与Spider平板上,以及在添加血清的YPD液体培养基中,CaCod1-/-菌株均丧失菌丝型生长能力.通过构建整合有钙应答基因CCH1与报告基因LacZ融合质粒的CaCod1缺失菌株,并测定β-半乳糖苷酶活性,发现该蛋白的缺失引起CCH1基因表达量的显著上调,说明CaCod1的功能与细胞钙稳态有关,其缺失引起胞质钙水平的升高.我们的研究结果表明,CaCod1在白念珠菌耐药性、菌丝型生长及细胞钙稳态等方面均发挥重要作用,这对开发新的抗白念珠菌药物具有指导意义.
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