【摘 要】
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本研究根据GenBank公布的单增李斯特菌的hlyA基因序列和金黄色葡萄球菌的nuc基因序列各设计一对引物和一条探针,在验证其特异性基础上,构建阳性重组质粒pMD18-hlyA和pMD1
【机 构】
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东北农业大学食品学院 黑龙江 哈尔滨 150030
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本研究根据GenBank公布的单增李斯特菌的hlyA基因序列和金黄色葡萄球菌的nuc基因序列各设计一对引物和一条探针,在验证其特异性基础上,构建阳性重组质粒pMD18-hlyA和pMD18-nue,并以此为模板进行双重荧光定量PCR扩增,制备标准曲线,分析方法的敏感度.进一步将该方法应用到人工染菌肉样中并分析最低检出限.结果表明,该方法对所有目标菌株均产生特异性扩增曲线,而其他非目标菌均不产生扩增曲线,表明该方法具有较强的特异性.该法对阳性重组质粒pMD18-hlyA和pMD18-nuc同时定量扩增所建立标准曲线的相关系数分别为0.998和0.997,敏感度分别为1.95×101拷贝·μL-1和1.87×101拷贝·μL-01.且同步检测人工染菌肉样中单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的最低检出限均为102cfu·g-1.该方法特异性强、敏感性高,为实现肉中单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的同步、快速、定量检测奠定基础.
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