【摘 要】
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[目的]探讨和建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,分别提取甘蔗、玉米
【机 构】
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广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室,南宁 530005
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[目的]探讨和建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,分别提取甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA.[结果]与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值在1.95～2.00、2.11～2.44之间,所获得的总RNA纯度较高.沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高.经异丙醇沉淀所得各个材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好；LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低.以Trizol—异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153 bp.[结论]改良Trizol—异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好,纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA.
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