【摘 要】
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目的 探讨慢病毒载体介导下人长链非编码基因H19 在胆囊癌GBC-SD 细胞中过表达,其表达量的变化对胆囊癌细胞生长的影响.方法 ①根据人类H19 基因的mRNA 序列,设计克隆引物,高保真酶合成H19 基因全长,构建重组过表达载体,最终转化至感受态DH5α 细胞,提取质粒,双酶切确认插入片段后送测序验证.在脂质体介导下转染293T 细胞,包装产生慢病毒,再将慢病毒载体转染至人胆囊癌GBC-SD
【机 构】
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中山大学附属第三医院肝脏外科 中山大学附属第三医院肝病实验室;中山大学附属第三医院生物治疗中心
【出 处】
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2015中国器官移植大会暨第二届中国器官移植医师年会
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目的 探讨慢病毒载体介导下人长链非编码基因H19 在胆囊癌GBC-SD 细胞中过表达,其表达量的变化对胆囊癌细胞生长的影响.方法 ①根据人类H19 基因的mRNA 序列,设计克隆引物,高保真酶合成H19 基因全长,构建重组过表达载体,最终转化至感受态DH5α 细胞,提取质粒,双酶切确认插入片段后送测序验证.在脂质体介导下转染293T 细胞,包装产生慢病毒,再将慢病毒载体转染至人胆囊癌GBC-SD 细胞,荧光定量PCR 检测H19 表达确定其过表达的有效性.CCK8 法检测细胞活力,平板克隆实验检测细胞增殖能力.
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