本研究中以甜菊糖苷为目标化合物，建立了HSCCC直接重复进样分离和Overlapping重复进样分离甜菊糖苷中三种化合物的方法，并对两种重复进样分离过程进行了比较。首先进行了两相溶剂系统的筛选，以正己烷-正丁醇-水做为优选的溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相。HSCCC仪器为DE公司Spectrum，分析模式，柱体积22.4mL，流速0.8mL/min，在线检测波长210nm。自动接样器收集馏分后用HPLC检测，合并含有相同化合物的馏分。直接重复进样方式是在样品注入后进行分离，至所有目标化合物被洗脱后注入下一针样品进行下一次分离。而Overlapping重复进样分离方式则是根据三个目标化合物的k值和固定相保留率，计算样品峰在色谱柱内的保留体积，在不影响HSCCC色谱分离的情况下，目标化合物还未完全从HSCCC色谱柱内洗脱出来就注入下一针进行分离。相比直接重复进样，Overlapping重复进样分离能够进一步减少分离时间和溶剂耗费。