靶向GPC-3基因转录对肝癌生长的抑制效果与机制

来源 :第九届中国肿瘤学术大会暨第十五届海峡两岸肿瘤学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shen41941395
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  目的锚定于细胞膜表面的癌胚型GPC-3为肝细胞恶性转化的特异标志,经调控Wnt信号通路,促进肝癌(HCC)发生与转移,但能否成为HCC治疗的潜在靶点及机制有待阐明。本研究以肝癌细胞和裸鼠皮下移植瘤模型,观察对癌细胞增殖和生长影响,分析Wnt信号通路关键分子表达并探讨其分子机制。方法以Western blotting检测肝癌细胞GPC-3表达,选择高表达细胞株后续研究;构建和筛选GPC-3-miRNA高效干扰质粒并测序鉴定,转染细胞株;以荧光定量聚合酶链反应评估干扰效率;以Western blotting分析GPC-3及WntCEP通路关键分子表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆及软琼脂克隆形成实验分析细胞克隆形成及非锚着依赖性生长能力;流式细胞术分析细胞周期;以杀稻瘟菌素筛选GPC-3沉默的稳定转染细胞株,裸鼠皮下注射、成瘤;观察皮下肿瘤形成时间及大小,计算瘤体;经苏木精-伊红染色法检查,并以免疫组化分析组织GPC-3、β-catenin、p-GSK3β及CyclinD1表达。
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