茯苓鲨烯合酶基因的克隆与生物信息学分析

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茯苓是中国传统的药用真菌,三萜类化合物是茯苓的重要药用成分,鲨烯合酶(SQS)是三萜类化合物生物合成途径中的一个关键酶,它可以催化两分子的法呢基焦磷酸合酶(FPP)缩合形成鲨烯焦磷酸(PSPP)随后PSPP通过重排形成鲨烯。根据鲨烯合酶(SQS)氨基酸的保守区,设计简并引物,以茯苓基因组DNA为模板,经PCR扩增得到一个1600bp的茯苓鲨烯合酶基因的特异片段,利用所获得的茯苓SQS基因的特异片段,采用反向PCR(IPCR)方法,分别获得茯苓SQS基因5’端非翻译区1710bp和3’非翻译区150bp。根据获得的序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增获得茯苓SQS基因全长cDNA序列,该序列全长为1497bp,编码498个氨基酸,蛋白相对分子质量为57kDa,等电点pI为6.11。根据所获得序列进行拼接得到茯苓SQS基因的全长基因组序列为2034bp,包括5个外显子和4个内含子。将茯苓SQS的氨基酸序列与其它物种的鲨烯合酶氨基酸序列比对分析发现,茯苓SQS与灵芝的SQS表现出最高的相似性(75%),其次为灰盖鬼伞(63%),玉米黑粉菌(55%)。根据SQS蛋白系统发育树分析可知,茯苓SQS与灵芝亲缘关系较近,与动物和植物的亲缘关系较远。
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