【摘 要】
：
目的:研制猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的单克隆抗体(McAb).方法:将GP5基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,利用构建成的重组真核质粒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSVGP5蛋白单抗.建立间接ELISA方法筛选阳性克隆.并对杂交瘤细胞株进行鉴定,分析单抗特性.结果:获得3株可分泌特异性抗PRRSVGP5蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C9、5D10、5F12.其中
【机 构】
：
南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,江苏,南京,210095
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会暨第六届代表大会
论文部分内容阅读
目的:研制猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的单克隆抗体(McAb).方法:将GP5基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,利用构建成的重组真核质粒免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSVGP5蛋白单抗.建立间接ELISA方法筛选阳性克隆.并对杂交瘤细胞株进行鉴定,分析单抗特性.结果:获得3株可分泌特异性抗PRRSVGP5蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C9、5D10、5F12.其中5D10的Ig亚类为IgM.ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为1:64～1:1024,腹水效价为1:3200～1:10240,同时用Westernblot、IFA和IPMA检测,结果均为阳性.5D10和5F12的相对亲和力不同,证明其识别不同的抗原位点.5D10、5F12具有病毒中和活性,中和效价分别为1:40和1:80.结论:获得2株抗PRRSVGP5蛋白的单克隆抗体,为进一步对PRRSV诊断和免疫预防研究奠定了重要基础.
其他文献
本文将PCV2-Cap蛋白重组腺病毒(rAd-Cap)0.2％的甲醛37℃作用一定时间后接种293细胞,盲传3代,检测灭活效果.将灭活的rAd-Cap加入适量的白油和氢氧化铝胶制成Cap蛋白重组腺病毒油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,3周后加强免疫一次,分别于一免后21天和35天进行ELISA抗体检测.为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,我们还进行了猪体免疫效力试验.通过ELISA抗体、攻
重组原核表达载体pET-ORF2的表达产物经可溶性分析表明该重组蛋白主要以包涵体形式存在.大量诱导表达重组Cap蛋白,本文利用HisBind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,通过WesternBlotting检测证明表达产物具有良好的免疫原性.用该纯化后重组蛋白作为亚单位疫苗,又利用本实验室所构建保存的pcDNA3.1-ORF2分别免疫BALB/c小鼠,对亚单位疫苗和基因疫苗做了对比试验,为进一
目的:用CpG序列与猪圆环病毒PCVwhn株编码CAP蛋白的基因(ORF2)共同构建核酸疫苗,为下一步在猪群上进行临床实验奠定基础.方法:用PCR方法扩增ORF2,同时人工合成一段CpG序列,利用上下游引物进行扩增.定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中新型构建核酸疫苗(pcDNA-PCV-ORF2-ISS).利用PCR方法和双酶切检测质粒pcDNA-PCV-ORF2-ISS;并送上海茵菌
本文以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆.通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalI制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株.采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原,其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致.鉴于新
本文根据Genbank上已发表的猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列和猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因序列,设计合成了两对特异引物,分别建立了PPV和PRV的单项PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了PPV和PRV的复合PCR诊断方法,即利用一次PCR反应,可同时扩增PPV的751bp和PRV355bp的特异性片段,而扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)及相应的培养细胞(PK-15)核
为了分析我国猪瘟病毒流行毒株的抗原特性,鉴定强弱毒抗原性之间的差异以及与单抗反应性之间的关系.本研究对覆盖了我国主要养猪省区的17个省市自治区不同养猪场进行CSFV的分离鉴定,采用猪瘟强弱毒单抗对分离的33株流行株进行了抗原反应性研究,并对E2基因主要抗原区域进行了序列分析.33株流行株与弱毒单抗的反应性除有广东、辽宁、北京各有一株OD值为0.30左右外,其余均为接近零,说明弱毒单抗针对的抗原表位
本试验利用Marc-145细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成份体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对细胞的感染作用,并通过改变加药方式(先加药物后加病毒、先加病毒后再加药物、病毒和药物感作后同时加入),初步探讨中药的抗病毒机制.结果表明:在安全浓度范围内,板蓝根水提物具有显著的抗病毒作用;连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显
本研究通过对红细胞与禽流感病毒(AIV)之间凝集和解凝集条件的选择,建立了鸡红细胞富集H5、H7和H9亚型AIV的方法.利用该方法对禽流感模拟污染粪便样品中AIV富集后,能够检测到HA滴度,RT-PCR扩增结果也呈阳性.对78份确诊样品临床检测表明样品通过红细胞富集处理后,再经RT-PCR检测,AIV检出率显著提高.这表明鸡红细胞富集方法有助于提高临床AIVRT-PCR检测的准确性.
本研究对1株鸽源H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增、克隆和序列测定.结果表明,HA基因全长1707bp,含有一个完整的阅读框,起始密码子和终止密码子,编码568个氨基酸.在HA裂解位点附近有连续6个碱性氨基酸的插入,HA基因有7个糖基化位点;将该基因序列与已发表的同一亚型参考序列比较发现,该毒株与A/chicken/Jilin/9/2004(H5N1),A/chicken/HongK
本研究应用经SPF鸡胚增殖的虎源高致病性禽流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)株,其对MDCK细胞的TCID50为10-7.36/0.05ml,经气管接种人工感染家猫,对感染致死的家猫和对照组1只家猫采取肺脏进行组织病理学观察和免疫组织化学染色,同时进行病毒分离和对耐过家猫与对照组家猫进行HI抗体检测.结果表明:剖检感染的死亡家猫发现以肺脏的损害最为明显,肺叶上有大片暗