镧示踪观察全脑缺血后大鼠大脑皮质及海马CA1区血脑屏障的变化

来源 :中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议(The 7th Biennial Meeting and the | 被引量 : 0次 | 上传用户:txzhang50
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  目的 探讨脑缺血大鼠大脑皮质和海马CA1区BBB超微结构和通透性的变化规律.方法 选用成年健康雄性SD大鼠45只,体重200-350 g,随机分为正常对照组、假手术组和全脑缺血10 min、20 min、30 min组.参照Pulsinelli-Brierley方法制作脑缺血动物模型,并按模型评价标准选择建模成功动物;假手术组仅电凝闭塞双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉.(1)组织学观察BBB:到期动物(每组取3只)经2%硝酸镧-2%戊二醛-0.1 mol二甲胂酸钠(镧醛)固定液灌注固定,开颅取脑并立即放入4℃镧醛固定液中,先取左侧大脑顶叶皮质和海马内侧段组织,并剪切成1 mm3组织块;后将组织块和右侧大脑立即分别放入4℃镧醛固定液后固定(4℃过夜)2h;右侧大脑连续冠状冰冻切片进行尼氏染色,显微镜观察;电镜组织块用含硝酸镧的二甲砷酸钠缓冲液洗涤后,经常规透射电镜标本制片、观察;(2)B B B通透性的评价:到期动物(每组6只)于处死前1h经尾静脉注入2%伊文氏蓝生理盐水溶液,用4℃生理盐水心内灌注至右心房流出无色液体、断头取左侧大脑称重,并置入体积分数为0.5的三氯乙酸溶液中匀浆、离心,取上清液按1∶3比例用无水乙醇稀释,荧光值通过荧光分光光度计测得.
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