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目的:研究新四环二萜类化合物-赤霉素衍生物 G 对蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性的影响。方法:采用改良 MTT 法检测化合物 G 对酪氨酸激酶家族重要成员-表皮生长因子受体(EGFR)高表达的人皮肤基底细胞癌 A431细胞株增殖的影响。从 SD 大鼠脾脏中提取 PTK, 按每20mg 脾脏组织加入150 1 RIPA 裂解液,低速离心后收集上清液(酪氨酸激酶提取物), 采用 BCA 法测定提取物的蛋白含量,-70℃冷冻保存。采用酶联免疫法(ELISA),以多聚酪氨酸多肽(poly[Glu:Tyr])为底物,用经磷酸盐缓冲液(PBS)10倍稀释的大鼠脾脏酪氨酸激酶提取物催化酪氨酸使其发生磷酸化,用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体 PY20检测磷酸化程度,以四甲基联苯胺(TMB)做为辣根过氧化物酶底物显色,评价化合物 G 对 SD 大鼠脾脏来源 PTK 活性的抑制作用。以纯化的商品化 EGFR(Sigma)作为 PTK 来源,采用 ELISA 技术,以多聚酪氨酸多肽(poly Glu-Tyr)为底物,用4 unit 的 EGFR 催化酪氨酸发生磷酸化, 用辣根过氧化物标记的单克隆抗体 PT-66检测其磷酸化程度,以邻苯二胺(OPD)做为辣根过氧化物酶底物显色,评价化合物 G 对纯化的 EGFR 活性的抑制程度。结果:化合物 G 对 A431细胞的半数抑制浓度(IC50)为7．57μg/ml;ELISA 结果显示:阳性对照药 Tyrphostin25在 2．84、5．68、11．36、22．73和45．45μg/ml 浓度下,对 EGFR 酪氨酸激酶活性的抑制率分别为19．63、 40．47、65．73、86．89和100%,呈现较好的量效关系,IC50为7．04μg/ml;化合物 G 在0．01、0．1、 1、10和100μg/ml 浓度下,对 EGFR 酪氨酸激酶活性的抑制率分别为0、23．65、31．29、50．52和 84．23%,亦呈现较好的量效关系,IC50为4．7μg/ml。阳性对照药 Tyrphostin25在3．5、7、15、 30和60μg/ml 浓度下,对大鼠脾脏提取物 PTK 活性的抑制率分别为10．31、18．38、25．56、54．71 和99．52%,呈现较好的量效关系,IC50为19．57μg/ml;化合物 G 在7．5、15、30、60和120μg/ml 浓度下,对大鼠脾脏提取物 PTK 活性的抑制率分别为22．84、27．33、68．86、75．43和97．35%,呈现较好的量效关系,IC50为21．41μg/ml。结论:化合物 G 对高表达 EGFR 细胞株-A431的增殖具有较强的抑制作用;以不同来源的酪氨酸激酶为作用靶点,采用不同的抗体和显色底物, 化合物 G 对 PTK 的活性均表现出显著的抑制作用,与阳性对照药的活性相当或稍高,提示蛋白酪氨酸激酶是其抗肿瘤作用的靶点之一。