一种刺激隐核虫特异性PCR检测技术的建立

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刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)是影响海水鱼类的一种危害最大、最广的重要寄生虫病原,能够引起海水鱼类的"白点病",造成严重的经济损失。本研究根据已发表的刺激隐核虫核糖体的ITS-2序列设计了一个反向引物,与上游的保守引物共同构建了一个特殊的PCR反应体系以直接,快速,特异性的检测该寄生虫,并利用与该寄生虫分类地位相近的几种纤毛虫来检测了其扩增的特异性。结果表明:利用P1-S15这对引物能特异性的检测出刺激隐核虫,而其它纤毛虫则无任何扩增产物出现。该引物灵敏度较高,DNA模板的量在45pg时仍能扩增出条带。利用P1/NC2,P1/S15这两对引物进行巢式PCR能增强其检测的灵敏度,即使有一个虫体存在时也能检测出。这种特异性的PCR方法为检测、预防以及海水鱼类感染刺激隐核虫的分子流行病学调查方面提供了一个非常有用的工具。
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