【摘 要】
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本研究采用体外培养旋毛虫肌幼虫方法制备ES抗原,用于免疫小鼠制各单克隆抗体,经过三轮筛选筛,得到2株稳定分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原抗体的杂交瘤细胞株,2株细胞分泌抗体亚型
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院 黑龙江哈尔滨150030
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究采用体外培养旋毛虫肌幼虫方法制备ES抗原,用于免疫小鼠制各单克隆抗体,经过三轮筛选筛,得到2株稳定分泌抗旋毛虫肌幼虫ES抗原抗体的杂交瘤细胞株,2株细胞分泌抗体亚型均属于IgG类.选取其中A11细胞株制备腹水并纯化,纯化后腹水效价为1-2.1×105,纯化后单抗浓度为3.8mg/ml.Western Blot结果显示单抗A11可识别ES抗原中43、49、53kDa三条蛋白带.用ES抗原免疫家兔制备兔抗ES抗原多抗并纯化,纯化后血清效价为1-1.2×106,纯化后多抗血清蛋白浓度为8.8mg/ml.用单克隆抗体作为捕获抗体,以多抗为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测方法.经方阵法确定单抗最佳工作浓度为7.6μl/ml,多抗浓度为4.4μl/ml.该检测方法对常见寄生虫抗原如日本血吸虫、弓形虫、猪鞭虫、猪囊尾蚴、猪蛔虫、华枝睾吸虫、捻转血矛线虫、前后盘吸虫均无交叉反应.本方法对ES抗原最小检出量为12ng/ml.检测肌幼虫24h培养液上清,5蚴/ml即可检测出ES抗原.将虫体进行超声破碎检出量为0.25蚴/ml.通过对感染旋毛虫小鼠不同时间血清进行检测,在感染后7d即可检测出循环抗原.利用制备的单抗A11结合免疫亲和层析法,对旋毛虫肌幼虫ES抗原进行提纯,之后进行SDS-PAGE分析,可见分子量大小约为43、49、53kDa的三条混合蛋白带,混合蛋白浓度为0.34mg/ml.
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