【摘 要】
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[目的]探索通过睾丸输出管注射法构建转基因小鼠的可行性。[方法]对7日龄C57仔鼠的睾丸实质组织，采用组合消化法结合Percoll不连续密度梯度离心法分离和纯化精原干细胞以做为供体细胞。利用人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体，通过脂质体介导体外转染供体细胞。通过睾丸输出管，将供体细胞和外源基因的共孵育液注射到经过白消安处理的爱体小鼠曲细精管内。受体雄鼠与雌鼠合
【机 构】
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中国农业大学动物科技学院 北京 100193 北京市畜牧兽医总站 北京 100107
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会
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[目的]探索通过睾丸输出管注射法构建转基因小鼠的可行性。
[方法]对7日龄C57仔鼠的睾丸实质组织，采用组合消化法结合Percoll不连续密度梯度离心法分离和纯化精原干细胞以做为供体细胞。利用人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体，通过脂质体介导体外转染供体细胞。通过睾丸输出管，将供体细胞和外源基因的共孵育液注射到经过白消安处理的爱体小鼠曲细精管内。受体雄鼠与雌鼠合笼配种产仔后，取仔鼠肝脏组织，应用PCR技术进行整合检测。荧光显微镜观察受体小鼠睾丸组织的冰冻切片中BGFP的表达。
[结果]注射后4周受体鼠中5只具有交配、受精能力，获得仔鼠192只。PCR检测仔鼠69只，阳性2只。荧光显微镜下观察阳性个体父本受体鼠的睾丸冰冻切片，有EGFP的表达。
[结论]利用睾丸输出管注射法，可以将外源基因注入受体曲精细管中，使之转染内源的精原干细胞，证实了此技术建立转基因动物的可行性。
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