【摘 要】
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枸杞为茄科枸杞属植物枸杞（Lycium barbarum L.）的成熟果实,具有悠久的药用历史,《2020版中华人民共和国药典》记载枸杞性平,味甘,归肺、肾、肝经。现代药理研究表明枸杞具有抗衰老、提高免疫、抗癌、抗疲劳和促进男性生育等功效,还对多种慢性疾病有效,如视力下降、慢性咳嗽、头晕。枸杞果实中含有多种生物活性成分,包括枸杞多糖、类胡萝卜素、酚酸、生物碱、黄酮类化合物、苯丙素类、有机酸、氨基酸
【基金项目】
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国家自然科学基金重点项目（31930076）; 111项目（B20088）; 黑龙江省头雁创新团队(林木遗传育种创新团队)
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枸杞为茄科枸杞属植物枸杞（Lycium barbarum L.）的成熟果实,具有悠久的药用历史,《2020版中华人民共和国药典》记载枸杞性平,味甘,归肺、肾、肝经。现代药理研究表明枸杞具有抗衰老、提高免疫、抗癌、抗疲劳和促进男性生育等功效,还对多种慢性疾病有效,如视力下降、慢性咳嗽、头晕。枸杞果实中含有多种生物活性成分,包括枸杞多糖、类胡萝卜素、酚酸、生物碱、黄酮类化合物、苯丙素类、有机酸、氨基酸等。在我国,枸杞分布广泛,资源丰富,是一种药食同源的重要林业产品,因此针对枸杞果实活性成分的研究对开发和利用枸杞资源具有重要意义。本研究成功制备高纯度枸杞多糖,并通过HPLC对枸杞多糖主要单糖组成成分进行分析检测,建立了同时检测枸杞果实中对香豆酸、异阿魏酸、芦丁、莨菪亭、异槲皮苷以及N-反式-阿魏酰基酪胺的高效液相色谱方法,首次通过超声辅助复配表面活性剂提取技术对枸杞小分子活性成分进行了高效提取,利用多种分离纯化手段实现主要小分子有效成分的富集、分离纯化,通过超声辅助高效提取枸杞籽油并对其成分进行分析鉴定。本文通过对枸杞果实中主要功能成分的分析检测以及提取纯化工艺的探究,为全面开发利用枸杞果实植物资源提供了丰富的理论基础与实验技术支持。研究成果如下:1.通过水提醇沉、双氧水脱色、sevage法除蛋白纯化了宁夏枸杞多糖,纯化后的枸杞多糖纯度为84.13%,利用高效液相色谱法测定宁夏枸杞多糖中单糖以甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖为主。2.建立了一种能够快速高效分析检测枸杞中六种目标活性成分对香豆酸、异阿魏酸、芦丁、莨菪亭、异槲皮苷以及N-反式-阿魏酰基酪胺的高效液相色谱方法。方法学验证表明,4种目标化合物在检测范围内线性关系良好（R~2＞0.999）,检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别小于0.65 ug/m L和1.68μg/m L,并且该HPLC分析方法具有良好的重现性、精密度、稳定性（R.S.D.＜4.2%）和回收率（97.56%-99.26%）,适用于枸杞果实中六种目标活性成分的定性定量检测。3.开发了超声辅助复配表面活性剂高效提取枸杞果实中四种主要活性成分的工艺,并通过单因素实验与BBD设计实验优化了复配表面活性剂的类型、配比、浓度以及超声功率、液固比、提取温度、提取时间等工艺参数,确定最佳提取条件为:表面活性剂剂组成:2.0%曲拉通X-114+4.0%槐糖脂,液固比:16:1 m L/g,提取温度:43℃,提取时间:29 min,超声功率250 W。在上述最佳的工艺条件下,对香豆酸、异阿魏酸、芦丁以及异槲皮苷的平均提取率分别为366.200μg/g、304.483μg/g、351.914μg/g、716.95μg/g。此外不同提取方法的对比发现,超声波辅助表面活性剂提取法是一种绿色高效、能耗低、工艺简单、提取率高的提取技术,为植物次生代谢产物的提取提供了新的参考。4.利用大孔吸附树脂富集枸杞果实提取物中的活性成分,并对富集条件进行了优化:大孔吸附树脂类型,NKA-9;上样体积,1.85BV;除杂洗脱剂浓度,30%乙醇;除杂洗脱剂体积,3BV;洗脱剂浓度,90%乙醇;洗脱剂体积,4BV。在得到的最佳富集条件下,枸杞果实中四种主要活性成分的回收率均高于72%,富集效果良好。5.建立了两步制备液相色谱结合硅胶柱色谱分离枸杞中六种目标成分的分离纯化方法,并确定了最佳分离纯化工艺参数。在最佳分离条件下,通过三步分离纯化工艺,从枸杞果实中分离得到6个单体化合物,即对香豆酸、异阿魏酸、芦丁、莨菪亭、异槲皮苷、N-反式-阿魏酰基酪胺,纯度达到98.3%。6.建立了超声辅助提取枸杞籽油的方法,并利用气相色谱-质谱探究了枸杞籽油的组成。在枸杞籽油中,含量较高的脂肪酸是9-顺式,11-反式共轭亚油酸和13-十八碳烯酸。与索氏提取法比较发现,超声辅助提取法枸杞籽油总提取率略高,总不饱和脂肪酸相对含量更高。本论文以枸杞果实为研究对象,系统研究枸杞果实中多糖、小分子活性成分以及枸杞籽油的高效提取纯化工艺与组成成分,首次开发了一种新型的超声辅助复配表面活性剂提取体系,对枸杞果实中的主要活性成分进行绿色、高效提取与预浓缩,利用大孔吸附树脂对小分子活性成分进行富集,并通过多种技术分离纯化获得六种枸杞中的小分子活性成分。本研究为枸杞资源的开发利用提供了科学依据,也为其他植物中功能成分的综合开发利用提供了思路。
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