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本实验以异丙隆为研究对象,在获得异丙隆抗体的基础上,建立了间接竞争和生物素-亲和素酶联免疫分析法(BAS-ELISA)。
建立了异丙隆的间接竞争ELISA法。用方阵滴定对包被抗原([1-(3-丙基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲]-OVA)和抗血清的浓度进行优化。优化的包被抗原和抗血清的浓度分别为0.1 mg/L和0.016mg/L。对1%的OVA和3%的脱脂奶粉作为封闭剂进行对比,结果表明3%的脱脂奶粉有较高的灵敏度。考察了有机溶剂甲醇对抗原抗体结合反应的影响,结果表明:甲醇含量在0-10%时,IC50变化不大。在优化的条件下,建立了异丙隆的间接竞争ELISA法标准曲线。线性回归方程为:抑制率(I)=3.63+35.73 lgC(r=0.993)。IC20、IC50和IC50值分别为3.42 ng/mL、21.14 ng/mL和121.3ng/mL。分析方法的测定范围是3.42-121.3 ng/mL。异丙隆和其它六种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应结果表明:异丙隆与这六种结构相似的脲类除草剂包括氯溴隆、氟草隆和绿谷隆的交叉反应率都小于0.51%,即这六种农药不干扰异丙隆的测定。
用间接竞争ELISA法分别对土壤和面粉中的异丙隆进行添加回收试验,土壤中的样品加标回收率在100%-108%,变异系数为3%-6%。面粉中的样品加标回收率在81%-84%,变异系数为5%-7%。该方法可用于土壤和面粉中的异丙隆的检测,处理大量样品分析时可用于初步筛选。
建立了异丙隆的生物素-亲和素酶联免疫分析法(BAS-ELISA)。用方阵滴定优化的包被抗原和抗血清的最佳浓度分别为0.1 mg/L和0.016mg/L。优化的生物素化山羊抗兔的最佳稀释倍数为500倍。在优化的条件下建立了异丙隆的生物素亲和素酶联免疫法的标准曲线。线性回归方程为:抑制率(D=7.29+24.27 lg C(r=0.986)。IC20、IC50和IC80值分别为4.79 ng/mL、57.14 ng/mL和593.14 ng/mL。分析方法的测定范围是4.79-593.1 ng/mL。