【摘 要】
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近年来,由于抗菌药的大量使用和滥用,细菌对现有抗菌药的耐药性逐渐上升,肠杆菌科耐药菌的出现和传播对人类和动物生命健康安全构成了严重威胁。替加环素以广谱的抗菌活性成为治疗多重耐药革兰阴性细菌感染的最后手段之一。而质粒介导的替加环素高水平耐药基因tet（X）变异体的出现严重威胁到替加环素的临床使用,尤其是替加环素耐药基因tet（X4）在不同菌属中的广泛流行,给公共健康造成了巨大的影响。本文通过对河南省
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（NO.32072923）；
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近年来,由于抗菌药的大量使用和滥用,细菌对现有抗菌药的耐药性逐渐上升,肠杆菌科耐药菌的出现和传播对人类和动物生命健康安全构成了严重威胁。替加环素以广谱的抗菌活性成为治疗多重耐药革兰阴性细菌感染的最后手段之一。而质粒介导的替加环素高水平耐药基因tet（X）变异体的出现严重威胁到替加环素的临床使用,尤其是替加环素耐药基因tet（X4）在不同菌属中的广泛流行,给公共健康造成了巨大的影响。本文通过对河南省郑州地区宠物源tet（X4）阳性大肠杆菌的流行情况以及传播机制进行分析,评估tet（X4）耐药基因从宠物传播到饲主的风险,为人医耐药菌株溯源及临床用药提供基础理论依据。2019年7-9月,从郑州市不同宠物医院采集宠物猫和狗的粪便样本共202份,分离大肠杆菌共186株,分离率为92.08%。186株大肠杆菌对氨苄西林、四环素、多西环素和氟苯尼考等药物耐药率较高,耐药率在74.66%-87.30%之间;其次为头孢噻肟、头孢喹肟、链霉素、头孢他啶、磷霉素和环丙沙星,耐药率在22.04%-54.30%之间,对阿米卡星、黏菌素和替加环素耐药率最低,分别为7.53%、4.84%和3.23%,未检测到美罗培南耐药菌株。通过PCR检测得到6株tet（X4）阳性大肠杆菌,检测率为3.23%,tet（X4）阳性菌株对氨苄西林、四环素、多西环素、链霉素和氟苯尼考均耐药。tet（X4）阳性菌株中5株携带tet（A）基因,4株携带bla CTX-M基因、2株携带fos A3和mcr-1基因,所有菌株均未检测到bla NDM基因,其中两株泛耐药菌株同时携带tet（X4）、bla CTX-M、fos A3和mcr-1基因。mLST分型结果显示,6株tet（X4）阳性菌株有5种ST型,分别为ST10（n=2）、ST2178、ST48、ST642和ST7366,其中ST7366为新型ST型。PFGE将6株菌分为A、B、C、D、E和F六种脉冲场图谱。tet（X4）阳性分离菌均能成功接合,tet（X4）阳性质粒复制子类型均为Inc HI1型,接合频率为5.5×10-7。Inc HI1质粒在37无抗培养15 d后仍能稳定存在,且tet（X4）阳性质粒不会对宿主菌的生长造成适应性代价。携带tet（X4）阳性Inc HI1质粒p T16R-1和p T28R-1与伤寒沙门氏菌中分离质粒R27的83%核苷酸序列有99.83%的同源性,质粒骨架相似度较高,最大的不同在于多重耐药区。本研究中Inc HI1质粒携带的tet（X4）基因位于△ISCR2-hp-ISCR2-tet（X4）-abh-IS1区域内。综上所述,郑州市宠物源tet（X4）阳性大肠菌株耐药情况严峻,tet（X4）阳性菌株间亲缘关系较远,无明显克隆传播迹象,tet（X4）的传播可能是以质粒介导的水平传播为主。tet（X4）阳性质粒的高稳定性及竞争优势利于tet（X4）基因的传播。同时tet（X4）基因上游存在的ISCR2与tet（X4）的转移关系密切。多元化的转移方式加速了耐药基因的传播,给替加环素耐药菌株的防控以及临床治疗带来了巨大的挑战。本研究结果可为控制宠物源替加环素耐药菌株的传播和进化提供理论依据。
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