Pygo2-miRNA在人脑胶质瘤的表达及作用机制研究

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Pygo2蛋白作为Wnt信号通路下游新功能蛋白,其表达紊乱与人脑胶质瘤恶性程度密切相关,调控机制非常复杂,很多机制尚不清楚。本实验旨在探讨人脑胶质瘤中异常表达的miRNA对Pygo2蛋白的可能调控作用。目的:研究miRNA靶向Pygo2在人脑胶质瘤的表达及作用机制方法:利用生物信息学预测软件(targetscan,miRanda,PicTar等)预测Pygo2的miRNAs,进而通过人脑胶质瘤miRNA表达谱芯片检测系统筛选候选的靶向Pygo2-3’UTR的miRNAs。针对差异表达最大的miRNA,首先构建成含有突变位点Pygo2-3’UTR的荧光素酶报告载体,然后利用Pygo2-miRNA过表达质粒下调Pygo2,从而抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭。结果:生物信息学预测软件预测出37个与Pygo2相关的miRNAs,结合人脑胶质瘤miRNA表达谱芯片低表达结果,发现Pygo2可能受包括miR-31、miR-34c-5p、miR-195、miR-214在内13个miRNAs调控。荧光素酶报告基因活性、real-time PCR验证及western blot实验提示,与其余miRNAs相比,miR-214最有可能在人脑胶质瘤细胞中调控Pygo2的表达。在体外上调miR-214的表达引起胶质瘤细胞增殖、侵袭力降低。结论:首次发现人脑胶质瘤中Pygo2的过表达可能与miR-214相关,miR-214能够通过下调Pygo2基因的表达抑制脑胶质瘤细胞的增殖和侵袭,提示miR-214可能作为重要的抑癌因子参与抑制脑胶质瘤增殖、迁移和入侵。这些在本文验证过的miRNA可能作为生物标记为临床诊断及预后判断提供帮助。
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