基于自然铜“非煅不入药”的传统认识,课题以前期研究结果为基础,选择生品,400℃4 h 3次,500℃4 h 1次,600℃2 h 1次,600℃4 h 3次,800℃2 h 3次6个样品为研究对象,采用大鼠骨折模型,比较其促进骨折愈合的功效,通过X射线片、骨密度、血清生化指标、骨痂中微量元素含量、脏器系数5个指标,对于6个样品促进骨折愈合的药效进行全面评价,发现自然铜能够促进骨折愈合,且煅淬后促进骨折愈合作用优于生品。在此结果基础上,课题组选择生品组和621组作为进一步探讨自然铜促进骨折愈合的机制的研究对象,选择从乳鼠头盖骨组织分离得到的成骨细胞为模型,以成骨细胞增殖率、ALP活性和矿化结节为基本指标研究不同自然铜炮制品含药血清对成骨细胞活性的影响,结果显示,自然铜含药血清具有促进成骨细胞活性的作用,能够促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,且煅淬品含药血清促进成骨细胞增殖、分化和矿化的活性均优于生品。TGF-β1/Smad信号通路是调节成骨细胞矿化的一个重要通路。为进一步探讨自然铜含药血清是否是通过调节TGF-β1/Smad信号通路促进成骨细胞矿化的,自然铜含药血清干预成骨细胞 24 h 后测定 ALP、Col Ⅰ、OC mRNA 的表达和 TGF-β1、p-Smad2/3、Smad4等蛋白的表达。结果显示,自然铜含药血清能提高ALP、Col Ⅰ、OC基因的表达和上调TGF-β1、p-Smad2/3、Smad4蛋白的表达,且自然铜煅淬品优于生品。论文为进一步确定自然铜促进骨折愈合的物质基础,研究自然铜给药后的入血成分含量与自然铜含药血清对成骨细胞的增殖作用之间的相关性,以期确定自然铜促进骨折愈合的活性成分。结果显示,Fe与含药血清的促进成骨细胞增殖作用具有良好的相关性,灌胃给予自然铜淬品后大鼠血清Ca含量明显升高。综上,煅淬能够增强自然铜促进骨折愈合的功效,而这种影响可能是基于体内微量元素的变化,我们认为煅淬自然铜微量元素在体内的吸收发生了变化,进一步影响微量元素在骨折部位的分布,进而促进骨生成。