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目的:通过培养和裸鼠皮下移植人肝癌细胞株SMMC—7721细胞观察绿茶提取物EGCG单体对人肝癌细胞株SMMC—7721裸鼠移植瘤中VEGF、MMP—9表达的影响,并探讨其可能的作用机制,以期为绿茶提取物EGCG用于临床肝癌治疗提供理论依据,并为肝癌的治疗提供新的思路和方法。
方法:1.体外复苏、培养人肝癌SMMC—7721细胞并采用不同浓度的EGCG单体溶液进行干预。将对数生长期的人肝癌SMMC—7721细胞以3.6×103/孔的密度接种于96孔板,待细胞贴壁后加入EGCG单体溶液,使EGCG单体终浓度为10μg/ml、40μg/ml、80μg/ml,继续培养,分别于24h、48h、72h用MTT法观察EGCG单体溶液对人肝癌SMMC—7721细胞增殖能力的影响,按公式:抑制率(IR)=[1—(实验组平均A570值—空白组A570值)(对照组平均A570值—空白组A570值)]×100%计算IR。2.培养人肝癌SMMC—7721细胞并将对数生长期的人肝癌SMMC—7721细胞密度调整为1.5×107/ml,以每鼠0.2ml接种于裸鼠腋窝皮下。待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为实验组和对照组,每天分别给予EGCG单体溶液50mg/kg·只灌胃和生理盐水灌胃,3周后瘤块离体称重。按公式:抑瘤率=(1—实验组瘤重/对照组瘤重)×100%计算抑瘤率;用免疫组织化学法检测实验组和对照组移植瘤中VEGF、MMP—9表达的不同;用PCR法检测两组裸鼠移植瘤中MMP—9DNA表达的不同。
结果:1.肝癌细胞体外实验结果显示,在EGCG单体溶液的作用下,人肝癌SMMC—7721细胞增殖能力明显受到抑制(P<0.05),并表现出量效和时效关系。2.动物体内实验结果显示,实验组裸鼠经EGCG单体溶液灌胃后,皮下移植瘤体积、重量明显小于对照组,抑瘤率达到30.13%±5.17%。免疫组织化学实验结果显示实验组移植瘤VEGF、MMP—9表达水平明显下调(P<0.05)。PCR法检测结果显示实验组MMP—9DNA表达明显低于对照组。
结论:1.绿茶提取物EGCG单体对人肝癌SMMC—7721细胞体外增殖具有抑制作用。2.绿茶提取物EGCG单体对人肝癌SMMC—7721细胞的裸鼠皮下移植瘤也具有生长抑制作用,并可以抑制移植瘤中VEGF、MMP—9的表达。3.EGCG单体的抑瘤作用可能通过抑制VEGF、MMP—9的表达从而抑制肿瘤浸润转移来实现的。4.绿茶提取物EGCG单体表现出较好的临床应用前景,可望成为临床肝癌治疗新的植物药。