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神经营养素低亲和力受体p75NTR是神经元细胞表面的一种糖蛋白，可以以相似的亲和力和各个神经营养素结合，但其胞内区无激酶活性，因此，在细胞内介导的信号通路一直是研究的热点之一。p75NTR属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族，其共有的特征就是胞外区的半胱氨酸串，及胞内区长约80个氨基酸的死亡结构域(death domain)。含有死亡结构域或类死亡结构域的蛋白可以相互或与某些蛋白作用，从而进行信号传导。p75NTR可以不依赖高亲和力受体Trk独立进行信号传递，诱导细胞凋亡。在神经系统的发育过程中，大量神经元细胞竞争有限的促进存活的神经营养素，导致一部分细胞死亡，而细胞凋亡的异常可能也是一些神经系统退行性疾病(如阿尔海茨默病、帕金森氏病)中神经元细胞大量消失的原因。因此，研究p75NTR诱导细胞凋亡的分子机制有着重要的意义。 首先，我们对p75NTR介导的信号通路进行了研究，通过酵母双杂交系统检测与p75NTR有相互作用的蛋白。该方法理论基础为：含有异源BD(DNA binding domain)和AD(transcriptionaI activation domain)的融合蛋白可以借助BD和AD的结合形成完整的反式作用因子，激活下游报告基因的转录。结果如下： 1，通过PCR扩增出完整的p75NTR胞内区的cDNA片段p75ICD，克隆至BD表达载体pAS2-1，与表达AD的鼠脑cDNA pACT2文库质粒共转化酵母Y190细胞，通过三营养缺陷(-Trp-Leu-His)、双报告基因表达(His，Lacz)的双重筛选及假阳性的排除，得到多个阳性克隆。 2，对这些阳性克隆的测序及同源性分析显示，一个长约2.7 kb的cDNA片段与RanBPM高度同源，并有着相同的读码框架。 3，在哺乳动物细胞COS7中共转染p75ICD和RanBPM的真核表达载体，经免疫共沉淀和蛋白印记杂交检测到这两个蛋白的表达，并验证了它们在细胞内的结合。 4，通过PCR扩增出p75NTR胞内区的两个已知功能结构域的cDNA片段p75dd、p75jux，分别构建其酵母表达载体，通过检测His报告基因的表达，确认RanBPM与p75ICD的结合位点位于死亡结构域。 5，通过PCR扩增出RanBPM蛋白中的SPRY结构域cDNA片段，克隆至pACT2载体得到pACT2-SPRY，通过检测His报告基因的表达，确认：单独的SPRY结构