CD3、CD4和CD8分子是表达于哺乳动物T细胞和部分胸腺细胞表面的共受体与信号转导分子，它们共同参与TCR介导的T细胞活化和胸腺细胞分化过程。本研究应用RT-PCR和RACE技术从猪的外周血淋巴细胞和胸腺细胞总RNA中，分别扩增克隆了猪CD3ε、CD4和CD8α分子的全长cDNA序列，对猪CD3ε、CD4和CD8α分子的cDNA序列及其推导氨基酸序列进行了分子信息学分析。采用融合蛋白原核表达策略，成功地在大肠杆菌中表达了猪CD3ε、CD4和CD8α分子的胞外区肽段。 1 序列分析结果表明，猪CD3ε cDNA序列长1241nt，其中5′非翻译区80nt，3′非翻译区570nt，开放阅读框591nt，该开放阅读框编码196个氨基酸的猪CD3ε前体蛋白（无糖基化位点）。推导氨基酸序列的分析结果表明，在猪ε蛋白的胞外区Cys⁴⁹、Cys⁹¹、Cys¹⁰⁸和Cys¹¹¹为保守性氨基酸残基；在猪CD3ε蛋白胞浆区中，存在免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）、内质网潴留基序和SH3结合基序，这些基序与T细胞的活化信号转导和TCR-CD3复合体装配相关，其中ITAM基序含有二个SH2结合基序和二个潜在酪氨酸磷酸化位点Tyr¹⁷⁷和Tyr¹⁸⁸。氨基酸序列比较结果表明，猪与人、鼠、狗、牛和绵羊CD3ε蛋白的氨基酸同源性分别为61.2％、58.7％、58.7％、65.1％和65.6％。 2 对猪CD4基因克隆和序列分析的结果表明，在猪的胸腺细胞和外周血淋巴细胞中存在两种方式剪接的CD4 mRNA转录本，其中一种mRNA转录本缺失编码40个氨基酸残基（包含跨膜区氨基酸）的120nt连续序列，推测该转录本编码猪分泌型CD4分子；猪CD4全长cDNA序列为2715nt，其中5′非翻译区158nt，3′非翻译区1183nt，开放阅读框1374nt，该开放阅读框编码457个氨基酸的猪CD4前体蛋白（含4个N-糖基化位点）。推导氨基酸序列分析结果表明，在猪CD4分子中7个Cys残基(Cys⁴³、Cys¹²²、Cys³²⁷、Cys⁴¹⁸、Cys⁴²¹、Cys⁴⁴⁴和Cys⁴⁴⁶)和2个Ser残基(Ser⁴³²和Ser⁴³⁹)在哺乳动物种间保守；在猪CD4分子胞浆区，存在高度保守的Src家族蛋白酪氨酸激酶p56^lck识别位点（KKTCQC）和内化相关双亮氨酸基序；氨基酸序列比较结果表明，猪与人、兔、鼠、狗和猫CD4蛋白的氨基酸同源性分别为56.0％、54.5％、44.9％、56.5％和56.9％。 3 序列分析结果表明，猪CD8α全长cDNA序列为2179nt，其中5′非翻译区165nt，3′非翻译区1303nt，开放阅读框711nt，该开放阅读框编码236个氨基酸的猪CD8α前体蛋白（含1个N-糖基化位点）。推导氨基酸序列的分析结果表明，在猪CD8α分子中，7个Cys残基(Cys⁴⁶、Cys⁵⁷、Cys¹¹⁸、Cys¹⁶⁷、Cys¹⁸²、Cys²¹⁶和Cys²¹⁸)在哺乳动物种间保守；在猪CD8α分子的胞浆区，存在Src家族蛋白酪氨酸激酶p56^lck识别序列CxCP。氨基酸序列比较结果表明，猪与人、牛、鼠、狗和猫CD8蛋白的氨基酸同源性分别为55.7％、57.6％、35.6％、56.8％和56.4％。 4 从重组质粒pGEM-TCD3A、pGEM-TCD4B1L和pGEM-TCD8B中，用PCR方法扩增扩增猪CD3ε、CD4和CD8α分子的胞外区基因表达序列，分别构建原核表达载体pGEX-4TCD3E、pGEX-6PCD4E和pGEX-6PCD8E，转化大肠杆菌BL21，在0.1mmol／L IPTG诱导下表达。SDS-PAGE检测结果表明，猪CD3ε、CD4和CD8α分子的胞外区肽段以融合蛋白形式在大肠杆菌BL21中表达，表达量分别占菌体总蛋白的20％、15％和20％。