尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)TRPA1基因的克隆及生物信息学分析

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TRP (Transient receptor potential)离子通道是一个位于细胞膜上的离子通道大家族,依据其序列同源性可将哺乳动物中的TRP离子通道分为六个亚家族:TRPC、 TRPM、TRPV、TRPA、TRPML和TRPP。TRPA1作为TRP离子通道家族中的一员,它有选择性地在毛发皮肤细胞、三叉神经、结状神经节及脊神经后根中的神经元亚群中表达。TRPA1与其他TRP离子通道成员相同,可以被多种理化方式激活,介导动物体内的多种感觉生理功能。因此其在生物体的冷觉、温觉、机械刺激以及疼痛感受中有重要作用。蛇类中某些蛇具有一个特化的器官即“颊窝”,它能够探测到细微的环境温度的改变,其灵敏度可以达到0.003℃。在这个敏感的感觉系统帮助下,蛇类能够有效的捕食。除此之外,还有研究表明红外视觉在蛇类躲避捕食者和温度调节上有重要作用。最近Gracheva等的工作将蛇类红外视觉机制的研究推进到了分子层面,一个温度敏感性的钙离子通道TRPA1被认为参与了蛇类的红外视觉功能,表明蛇类的红外探测机制与视觉传导机制是不同的。三种蛇类(Boidae(boas)、Pythonidae(pythons)和Crotalinae(pit vipers))的TRPA1的热激活阈值被测定,并且该阈值与相应蛇类的红外敏感性相一致。TRPA1在三种蛇类进化中发生了平行进化,这种进化方式可能帮助蛇类适应不同的生存环境。在哺乳类中也发现具有红外探测能力的吸血蝙蝠(Desmodus rotundus),但是与蛇类不同,在吸血蝙蝠中,TRPV1介导了其红外探测功能,在哺乳类和爬行类中发生这种改变的原因并不清楚。此外,发现有颊窝蛇类与无颊窝蛇类的TRPA1离子通道都具有热敏感性,因此部分蛇类特有的感温器官颊窝在红外探测过程中所起的作用仍旧值得研究。在此基础上,本研究从尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)中克隆了其TRPA1序列并测序,推导出对应的氨基酸序列。对克隆的到的片段与已经报道的其他几个物种的TRPA1片段进行了氨基酸同源性比对,并建立系统树。在经过上述工作后,本研究得到结果和结论如下:1、扩增得到的尖吻蝮TRPA1基因片段长3287bp,推导出编码1081个氨基酸残基。多序列比对发现尖吻蝮蛇TRPA1与西部菱斑响尾蛇(Crotalus atrox) TRPA1相似度高达92%,表明尖吻蝮蛇红外探测的机制与西部菱斑响尾蛇可能是相同的。2、扩增得到尖吻蝮蛇TRPA1片段ORF区相对于西部菱斑响尾蛇缺失90bp片段,对应30个氨基酸残基,该片段的缺失可能导致了TRPA1跨膜结构域的改变,造成其部分功能的改变,将西部菱斑响尾蛇TRPA1去掉上述片段后,对比其原始蛋白构象发现该片段的缺失导致了构象的改变,提示可能该区间对于TRPA1的某些功能是必须的。3、分析扩增得到的基因片段,对其氨基酸序列二级结构、三级结构进行分析,预测了氨基酸序列折叠区及跨膜结构域。尖吻蝮蛇TRPA1具有五个跨膜结构域及15个重复的锚蛋白结构域。4、将几个物种的HPA1氨基酸序列进行同源性比较发现TRPA1有高度保守区,同时构建了系统发育树。TRPA1在爬行类与哺乳类中相似性不高,发生了很大的改变。
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