目的探讨脱细胞结膜的制备方法,并观察其移植修复兔结膜缺损的可行性。方法1.脱细胞结膜基质的制备取新鲜猪球结膜(宰后3小时,其仅含少许结膜下组织)先用0.2%戊二醛处理5min,再用0.25%胰酶/0.02%EDTA、1%TritonX-100、或两者联合进行脱细胞处理,根据DAPI染色结果筛选出合适的结膜脱细胞方法,脱细胞处理后,将结膜置于超净台内通风干燥、紫外消毒8h备用。2.脱细胞结膜基质的相关检测使用可见分光光度计检测检测脱细胞结膜基质的透光性,细菌、真菌培养行微生物检测,免疫组织化学法检测其抗原性,MTT法检测细胞毒性。3.异种脱细胞结膜作为移植材料,修复兔结膜缺损的应用(1)兔结膜缺损动物模型的建立游离去除实验兔鼻上方约20mm×8mm球结膜、筋膜,并剪除对应部分睑结膜。(2)移植材料的动物模型随机将20只新西兰大白兔分成4组,每组5只。A组移植制备的脱细胞结膜基质;B组移植羊膜;C组移植未脱细胞异种结膜;D组不给予治疗。术后3天,1周,2周,行结膜荧光素钠染色大体观察对照组及实验组结膜愈合、结膜囊狭窄、结膜粘连和血管化情况;术后1周,2周,6周取材处死实验组兔分别行HE染色,6周后取材行免疫荧光染色,有无结膜上皮细胞蛋白的表达,活体印记细胞学检查,观察异种脱细胞结膜移植治疗结膜缺损的效果。结果1.与TritonX-100和胰酶/EDTA单独处理相比,先用1%TritonX-100作用24h,再用0.25%胰酶/0.02%EDTA作用2h,可将猪结膜中的细胞脱除干净。2.脱细胞结膜基质的透明度好,无抗原性,无细胞毒性,其胶原纤维排列整齐、结构良好、无细胞成分。3.脱细胞猪结膜移植组(A组)植片存活良好,1周时睑结膜缺损处可见荧光素钠染色,移植物覆盖处光滑不着色,角膜缘处新生血管长入,HE染色可见单层结膜上皮细胞覆盖;2周后未见荧光素钠染色着色,移植物大量血管长入,呈粉红色外观,HE染色可见结膜上皮覆盖多层细胞,结膜印迹细胞染色发现有杯状细胞和上皮细胞;移植后6周行免疫荧光染色发现结膜上皮细胞角蛋白(PCK)表达阳性,说明脱细胞结膜基质上皮完整。羊膜移植组(B组)1周后羊膜出现溶解吸收,2周后结膜瘢痕形成。未脱细胞结膜移植组(C组)1周后移植的异体结膜已溶解脱落,2周后结膜瘢痕形成,未给予治疗的结膜缺损组(D组)2周后均形成结膜瘢痕。结论1.TritonX-100和胰酶/EDTA联合处理可有效脱除结膜上皮和基质细胞。2.异体脱细胞结膜基质无细胞毒性、免疫原性低,血管化速度快,可作为良好的结膜移植物。3.异种脱细胞结膜基质可作为结膜上皮移行的桥梁,修复结膜缺损,且术后无结膜瘢痕、睑球粘连、结膜囊狭窄等现象发生。