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第一部分33115例体检者抗M2型线粒体抗体筛查的结果分析 目的：了解体检人群中原发性胆汁性肝硬化(PBC)患病率及潜在患病风险。 方法：对33115名体检者检测血清抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)及肝功能，统计分析PBC的患病率、患病特点、好发人群、危险因素。 结果：筛查出349例抗M2型线粒体抗体阳性，确诊PBC36例，患病率为108.71/105；其中男性9例，女性27例，患病率分别为53.21/105、166.66/105，女性高于男性(P＜0.01)。36例PBC患者平均发病年龄(57.00±14.05)岁。年龄分组≤40岁组、41~60岁组与≥61岁组患病率分别为18.79/105、131.00/105和440.14/105，各年龄组患病率之间差异有统计学意义(P＜0.01)；≤40岁年龄组患病率低于其余两组(P＜0.01)，≥61岁组患病率最高(P＜0.01)。确诊PBC患者碱性磷酸酶(ALP)均显著升高(223.01±160.67) U/L；其中9例患者 ALT轻至中度升高(57.00±9.81)U/L，4例 ALT升高至100 U/L以上(177.00±59.76)U/L；12例直接胆红素(DBil)升高(16.82±14.66)umol/L；未见肝内胆管梗阻的影像学表现。结合临床资料，部分确诊患者有抽烟、饮酒史、阴道及肠道感染史、口服激素类药物的用药史等PBC相关患病风险因素存在。313例单纯AMA-M2阳性者，这部分体检者只有AMA-M2阳性，没有ALP异常及PBC相关临床症状出现。 结论：PBC在体检人群中的患病率并不罕见，运用高敏感度的检测方法是筛查PBC关键；单纯AMA-M2抗体阳性者，其中一部分可能是PBC的早期患者，应当做好疾病随访密切关注疾病进展。 第二部分 NF-κB信号通路与原发性胆汁性肝硬化发病机制的初步研究 目的：通过检测IL-18刺激CD4+T细胞体外增殖情况及NF-κB信号通路的激活状态，初步探讨NF-κB信号通路在PBC发病机制中的作用。 方法：分别收集30例健康体检者、30例单纯AMA-M2阳性者和31例PBC患者外周血，采用密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMC)，磁珠分离法分选出CD4+T细胞。对分选后的细胞运用流式细胞术检测分选纯度并进行细胞计数。运用CCK-8检测IL-18对CD4+T细胞的体外增殖作用，根据CCK-8实验条件优化选取细胞增殖最佳条件，比较各研究组经IL-18刺激后的细胞增殖率。从各研究组中分选出的CD4+T细胞经IL-18刺激后，收集细胞分别提取胞质蛋白及胞核蛋白，运用Western blot分别检测刺激前及刺激后胞质蛋白IκBα和胞核蛋白NF-κB p65的蛋白表达，比较各研究组经IL-18刺激后IκBα和NF-κB p65蛋白表达量的下调率及上调率，了解NF-κB信号通路在各研究组中的激活状态。同时分析PBC患者组肝功能指标异常特点。 结果：1、流式细胞术检测CD4+T细胞分选纯度在90％以上，细胞滤过液中CD4+T细胞约0.1%，分选完全并且效率高。2、外周血CD4+T细胞计数及CCK-8细胞增殖实验：PBC组CD4+T细胞(0.859±0.154)×106/ml显著高于正常组与单纯AMA-M2阳性组(0.569±0.101)×106/ml、(0.546±0.127)×106/ml(P＜0.01)；以细胞数量105/孔接种、加入CCK-8试剂后孵育4h是CD4+T细胞增殖实验的最适条件；经IL-18刺激后各研究组CD4+T细胞均可被刺激增殖，并且PBC组增殖率(23.85%)高于其余两组(11.75%、12.98%)(P＜0.01)。3、Western blot：未给予IL-18刺激前，与其余两组相比、PBC组IκBα蛋白表达量最低(P＜0.01)，NF-κB p65蛋白表达量最高(P＜0.01)；给予IL-18刺激后，IκBα蛋白表达下调率分别为正常组15.25%、单纯AMA-M2阳性组13.37%、PBC组34.37%，三者之间差异有统计学意义(P＜0.01)；正常组与单纯AMA-M2阳性组相比下调率无差异(P＞0.05)；PBC组下调率高于其余两组(P＜0.01)；经IL-18刺激后，各组NF-κB p65蛋白表达量上调率分别为23.91%、20.77%、61.35%，三组之间有差异(P＜0.01)，正常组及单纯AMA-M2阳性组相比上调率无统计学意义(P＞0.05)；PBC组NF-κB p65蛋白表达上调率高于其余两组(P＜0.01)。4、对PBC组肝功能生化指标结果进行分析：肝功能异常主要是ALP和γ-GT的显著升高，TBil和DBil的显著升高，转氨酶轻中度异常。 结论：1、PBC患者外周血中存在大量增殖能力强、对 IL-18刺激反应敏感度高的CD4+T细胞；2、IL-18能够刺激CD4+T细胞增殖，可能在PBC的发病中起重要作用；3、PBC患者CD4+T细胞的NF-κB信号通路呈现激活状态，经IL-18刺激后，NF-κB信号通路活化显著，可能是参与PBC发病的机制之一。