单子叶石蒜科植物黄花石蒜甘露糖结合凝集素基因的克隆及序列分析;风雨花凝集素基因转化烟草及其在转基因烟草中的表达

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黄花石蒜凝集素(Lycoris chinensis Agglutinin,LCA)是来源于石蒜科的具有多重生物学活性的甘露糖结合蛋白,属于单子叶甘露糖结合凝集素。这类凝集素由于具有独特的糖结合特异性、逆转录病毒抑制活性和保护农作物免受昆虫和线虫攻击而引起人们浓厚的兴趣。本文采用同源克隆的方法,通过对黄花石蒜球茎RNA的提取,反转录成cDNA,从Genbank上比较已登录的石蒜科凝集素的序列,找出其保守序列,并结合软件设计了简并引物,进行3’RACE末端快速扩增,得到了3’端的部分序列(序列号为AY690318),序列长为516bp,然后根据已得到的序列设计特异性引物,应用在cDNA的3’端随机添加若干PolyA的方法,在cDNA模板3’端加上PolyA,再以此为模板进行PCR,从而克隆得到了黄花石蒜5’端的部分序列(序列号为AY763111),序列长为411bp,将3’与5’序列合并,就能获得cDNA全长序列(序列号为AY763112)。
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