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合理设计的小肽可以完全或部分模拟完整蛋白分子的功能,因此肽类激动剂和拮抗剂的研究在基础研究以及临床治疗等领域有着重要的意义。本论文分别以兔抗重组人α-2bIFN多抗及天然表达IFN受体的人羊膜细胞(WISH)作为筛选靶标,利用噬菌体随机12肽库和7肽库研究α-2bIFN的抗原表位和IFN受体结合表位,为进一步研究IFN与其受体之间的相互作用机制及设计小分子IFN类似物药物打下基础。
利用Anti-α-2bIFN多克隆抗体致敏的免疫磁性微球,本研究对噬菌体随机12肽库进行生物淘筛。经4轮淘筛后,ELISA方法鉴定噬菌体克隆的阳性率为53%。随机挑取12个阳性克隆测序后与IFN氨基酸序列进行了同源性分析,根据分析结果将其分为三组,分别对应α-2bIFN三个抗原结构域,与抗原性预测结果相吻合,其中第二组与IFN受体结合区AB环接近。分别选取上述三组中各一个噬菌体模拟肽(No.44、91、12),经免疫原性以及免疫反应性实验表明,上述小肽均可以模拟α-2bIFN的部分表位。
此外,本研究还建立了以WISH全细胞为靶细胞,采用了竞争性洗脱的全细胞筛选体系,结合以Anti-IFN抗体为靶分子的附加筛选,进一步从7肽库中筛选了IFN受体的结合表位。经过6次混合筛选后,阳性噬菌体克隆得到了有效富集,阳性率达到51%。经细胞ELISA和细胞免疫组化实验确认后,随机挑取10个阳性克隆进行测序分析,结果可分为三组,分别对应α-2bIFN的两个主要受体结合域。以其中对应不同受体结合域的2个模拟序列为基础,分别化学合成了SP-7和FY-7两个7肽。竞争实验的结果表明,上述两种合成的7肽均可以竞争性地抑制IFN与受体或抗体的结合,提示了本研究筛选并合成的7肽有可能成为与IFN受体结合的功能性小肽。