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新城疫病毒(Newcastle Disease virus,NDV)是副黏病毒科,禽腮腺炎病毒属的单股负链RNA病毒。NDV能够特异性的在禽细胞和肿瘤细胞中高效复制,意味着NDV通过多种手段突破宿主抗病毒免疫,建立感染,其中具体机制不清。NDV基因组可以编码六种病毒结构蛋白,还编码两个非结构蛋白V和W蛋白。NDV与其他病毒相似,也会与宿主产生复杂的相互作用,来抑制细胞的抗病毒先天免疫反应。宿主的各种模式识别受体(PAMP)能与病毒RNA相互结合,通过线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)以刺激调控下游干扰素反应。本文就本研究确证NDV V蛋白与宿主细胞蛋白MAVS之间的相互作用,并探讨了NDV拮抗宿主细胞抗病毒反应的分子机制。本研究使用了NDV Herts/33,ZJ-1,Lasota毒株感染HeLa细胞,发现在病毒感染后期MAVS通过蛋白酶体途径被降解,而不影响MAVS的转录水平。转染NDVV蛋白可以降解MAVS,而NDV其他病毒蛋白不行。激光共聚焦结果显示,NDV感染HeLa细胞12h后,V蛋白开始与MAVS在细胞质中共定位。实验还通过间接免疫荧光实验(IFA)和免疫共沉淀(CO-IP)实验来证明NDV V蛋白与MAVS的相互作用,并确定V蛋白与MAVS的第360-510位氨基酸区域相互作用,证实V蛋白能介导MAVS泛素化水平升高。双荧光素酶报告基因试验表明,V蛋白能抑制并以剂量依赖的形式靶向抑制MAVS介导的ISRE和IFN-β启动子的激活,而不能抑制MAVS下游的TBK-1、IKK和IRF5D介导的ISRE和IFN-β启动子的激活。以上实验研究验证了NDV V蛋白负调控MAVS介导的信号通路。通过软件预测出MAVS的360-513氨基酸位点的赖氨酸泛素化修饰位点,构建MAVS的K362A、K371A、K420A、K461A和K500A突变质粒。在293T细胞中,共转染NDV V质粒与MAVS突变质粒,免疫共沉淀(CO-IP)实验结果显示,第362和461位赖氨酸是V蛋白介导的MAVS泛素化修饰的关键位点。通过使用实验室已有的NDV病毒V蛋白缺失株和WT株感染HeLa细胞后观察MAVS降解情况,结果证明病毒V蛋白缺失后,降低了细胞MAVS蛋白降解程度,在病毒感染后期,可以被诱导更高的下游干扰素刺激基因(ISG)和IFN-β生成,病毒滴度水平比感染WT株显著下降。确证了NDV V蛋白靶向抑制MAVS介导的I型干扰素信号通路,抑制先天性抗病毒免疫免疫机制。