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目的通过体外实验(小鼠骨髓干细胞诱导的巨噬细胞)与体内实验(STZ,链脲菌素,诱导I型糖尿病小鼠),观察GDNF(胶质源性神经营养因子)对糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复过程角膜上皮愈合、炎症反应的作用,并探讨其作用机制。方法1.体外实验体外培养小鼠角膜骨髓干细胞。实验分组(1):对照组、正常组、C57组及C57+GDNF组。使用酶标仪及共焦显微镜检测正常组与C57组巨噬细胞吞噬能力的差异。实验分组(2):对照组、正常组、正常组+IL4组及正常组+IL4+GDNF组。检测M1型巨噬细胞转化M2型巨噬细胞比例及PCR、ELISA检测M1、M2型巨噬细胞相关因子表达变化。实验分组(3):对照组、巨噬细胞M0组、巨噬细胞M0+LPS组及巨噬细胞M0+LPS+GDNF组。检测M1型巨噬细胞转化M2型巨噬细胞比例及PCR、流式细胞仪检测M1、M2型巨噬细胞相关因子表达变化。实验分组(4):对照组、对照组+LPS、对照组+LPS+GDNF(10ng/ml)组、对照组+LPS+GDNF(50ng/ml)组及对照组+LPS+GDNF(100ng/ml)组。检测不同浓度GDNF与巨噬细胞转型比例相关性,PCR、ELISA检测M1、M2巨噬细胞相关表达产物比例。2.体内实验选取链脲佐菌素(stz)诱导的c57/bl6i型糖尿病小鼠与正常c57/bl6小鼠。建立小鼠角膜上皮损伤模型,给药方式为结膜下注射。实验分组:正常组、糖尿病组、糖尿病+gdnf组。检测正常与糖尿病小鼠角膜上皮内源性gdnf表达量差异;观察gdnf对糖尿病小鼠角膜上皮损伤愈合速率的影响;检测gdnf对糖尿病小鼠角膜上皮损伤后炎症反应的影响;检测gdnf影响糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复的m1、m2巨噬细胞相关产物的pcr结果。结果1.体外实验部分通过对小鼠骨髓干细胞诱导的巨噬细胞的实验研究,结果发现:与stz组相比,stz+gdnf组后巨噬细胞的吞噬能力明显增强(p<0.05);巨噬细胞m2型抗炎因子的表达实验显示:与正常+il-4组相比,正常+il-4+gdnf组m2型相关的抗炎因子表达明显增加(p<0.05);外源性gdnf抑制巨噬细胞m1型相关性炎症因子表达影响的实验表明:与正常组,正常+lps组相比,正常+lps+gdnf组相关炎症因子的表达明显下降;gdnf抑制巨噬细胞m1型相关炎症因子表达影响是否有浓度相关性实验表明:gdnf在抑制巨噬细胞m1型相关因子表达方向,与gdnf浓度相关性不大。2.体内实验部分通过对正常与stz小鼠进行实验的研究发现:两组小鼠的角膜上皮刮除后,stz组的愈合速率和正常组相比明显放缓(p<0.05),糖尿病+gdnf组与糖尿病组相比明显加快(p<0.05);stz组小鼠角膜的上皮刮除后24小时促炎相关因子cox-2表达量、48小时中性粒细胞浸润的数量、m1型巨噬细胞标记的inos、il-12的表达量及上皮刮除之后72小时m1型巨噬细胞的数量较正常组明显增高(p<0.05),而stz+gdnf组与stz组相比则显著下降(p<0.05);stz组小鼠角膜的上皮刮除后72小时角膜的m2型巨噬细胞的标记物arginase-1与il-10表达量相比较正常组明显减少(p<0.05),而stz+gdnf组较stz组明显增加(p<0.05);结论gdnf促进stz小鼠角膜上皮的损伤愈合;gdnf促进小鼠角膜上皮愈合可能与巨噬细胞原代及巨噬细胞m1型向m2型极化有关;gdnf抑制巨噬细胞m1型炎症因子的表达,诱导巨噬细胞m1型转化巨噬细胞m2型;gdnf可增加巨噬细胞m2型的抗炎因子的表达;gdnf可以促进巨噬细胞吞噬能力的增强。