论文部分内容阅读
目的:最近研究发现,在神经胶质瘤细胞中多梳蛋白家族在表观遗传学水平发挥着转录抑制作用并与胶质瘤的发生发展密切相关,与此同时一些长链非编码RNA(lncRNAs)被发现在神经胶质瘤异常表达并与肿瘤的分级和分型相互关联。通过分析恶性神经胶质瘤U87细胞诱导分化过程中长链非编码RNA表达变化以及上调和下调神经系统多梳蛋白1(NSPc1)表达后候选互作lncRNAs的表达变化,鉴定在胶质瘤细胞U87中可能与NSPc1存在功能性相互作用的lncRNAs分子。方法:首先,检测不同恶性程度的胶质瘤细胞系H4、U251、U87中NSPc1的表达差异并实时定量PCR检测候选互作lncRNAs的表达水平;然后,利用10-6mol/L的维甲酸诱导U87细胞分化,检测NSPc1基因在诱导分化过程中的表达变化,同时分析在U87细胞分化过程中候选lncRNAs的表达变化;随即,通过lipo2000脂质体转染上调或敲低NSPc1基因的表达,同时检测转染前后U87细胞中候选lncRNAs的表达变化。随后,通过细胞增殖能力实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)技术鉴定筛选出在U87细胞内与NSPc1可能存在功能性相互作用关系的lncRNAs分子。结果:1不同神经胶质瘤细胞系中,NSPc1表达量与细胞系的恶性程度成正相关,各候选互作lncRNAs的表达水平存在显著差异。2在恶性度较高的神经胶质瘤细胞系U87的0~10天维甲酸诱导分化过程中,NSPc1的表达先下降再升高,在第6天达到最低;各候选lncRNAs的表达呈逐渐下降趋势。3在U87细胞中上调或下调NSPc1的表达量后,多个候选互作lncRNAs的表达发生显著变化,其中MALAT1、ANRIL变化尤其明显。4在U87细胞中敲低MALAT1、ANRIL后,细胞的生长受到抑制,细胞的凋亡比例增加。5 RIP技术发现U87细胞内MALAT1、ANRIL等lncRNAs分子与NSPc1蛋白存在相互作用的关系,并且在细胞诱导分化过程中NSPc1对ANRIL的富集量与NSPc1的表达量呈正相关。结论:1 NSPc1在神经胶质瘤中表达,并与神经胶质瘤的恶性度成正相关。2 MALAT1、ANRIL能促进U87细胞的增长,抑制细胞的凋亡。3 NSPc1与MALAT1、ANRIL相互作用,并且ANRIL在U87细胞分化过程中与NSPc1存在功能性相互作用。