【摘 要】
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溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）作为弧菌病的重要病原体之一,可引起鱼、贝、虾等水生动物产生败血症、体表溃疡和出血等病变。使用微生态制剂控制水产养殖动物的细菌性疾病具有广阔的应用前景,目前芽孢杆菌在水产养殖中的应用越来越多,但是关于病原菌是如何应对拮抗菌的作用还有待研究。芽孢杆菌为红树林的优势菌属,本研究首先从湛江海域的红树林地区分离筛选出一株对溶藻弧菌HY9901具有抑制作用的
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溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）作为弧菌病的重要病原体之一,可引起鱼、贝、虾等水生动物产生败血症、体表溃疡和出血等病变。使用微生态制剂控制水产养殖动物的细菌性疾病具有广阔的应用前景,目前芽孢杆菌在水产养殖中的应用越来越多,但是关于病原菌是如何应对拮抗菌的作用还有待研究。芽孢杆菌为红树林的优势菌属,本研究首先从湛江海域的红树林地区分离筛选出一株对溶藻弧菌HY9901具有抑制作用的芽孢杆菌菌株,并对其生物学特性进行研究。经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,将其命名为ZJ2009,确定其最佳培养条件为:在锥形瓶中培养基的装载量为10%～20%、添加1.5%Na Cl、初始p H值为6.0～8.0的BHI培养基中37℃培养12 h;该拮抗菌株具有广谱抑菌性,对多种抗生素敏感,对斑马鱼安全无毒副作用,且对溶藻弧菌的感染有36.2%的保护率。利用RNA-seq技术研究溶藻弧菌对ZJ2009菌株的无细胞发酵上清液（CFS）的应答反应。结果表明:筛选出差异表达基因共1249个,其中有511个基因表达量上调,738个基因表达量下调。对差异表达基因进行GO富集分析,差异表达基因主要参与细胞过程和代谢过程等生物途径,主要行使结合功能和催化功能等。KEGG富集分析表明,差异表达基因显著富集、富集程度较高的Pathway有核糖体、嘌呤代谢、丙酮酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢以及苯乙烯降解等。在显著差异表达基因中挑选oxyR及其调控的相关基因对溶藻弧菌的应答反应进一步进行研究。用原核表达载体p ET-28a-oxyR成功表达OxyR蛋白并且制备了OxyR多克隆抗体,利用Western blot和q RT-PCR对OxyR及ahp C、trx C、dps2、kat A、cyd A的表达进行分析。将ZJ2009的CFS以不同浓度以及不同时间作用溶藻弧菌后,OxyR蛋白的表达量升高,ahp C、trx C、dps2的表达量上调,kat A、cyd A的表达量下调。研究结果表明:从湛江红树林地区分离出的解淀粉芽孢杆菌ZJ2009对溶藻弧菌的抑制作用较强,可能通过抑制溶藻弧菌核糖体蛋白的表达,使蛋白的翻译受阻来发挥其拮抗作用;溶藻弧菌的核苷酸、丙酮酸等代谢途径和抗氧化途径参与了对解淀粉芽孢杆菌的应答。
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