绵羊诱导多能性干细胞和人类体细胞转分化为PGC样细胞的研究

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早在1996年,科学家就利用体细胞核移植重编程产生了克隆羊——Dolly,这使得科学家能够重新审视胚胎发育理论,证明了高度分化的体细胞是可以逆转的,具有遗传的全能性,揭开了分子生物学领域崭新的一页。  产生克隆绵羊或者转基因绵羊,对器官移植、建造人类疾病模型、改良物种、增加经济效益等方面意义重大。然而,传统转基因技术对外源基因的低效率控制,导致外源基因的表达效率极低,从而极大地限制了转基因绵羊的应用。  胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)是从早期胚胎内细胞团(ICM)分离得到并在体外培养的细胞系,具有无限增殖潜能和发育为体内任何种类细胞的潜力,可以提高基因打靶效率。目前,已产生胚胎干细胞的只有少数几个物种,包括小鼠、人类、恒河猴和大鼠,而绵羊胚胎干细胞由于从其胚胎分离和维持,因此一直无法建立。  2006年,诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)技术产生,该技术将外源的四种转录因子(Oct4, Sox2, c-Myc和Klf4)导入小鼠成纤维细胞,使小鼠成纤维细胞重编程至多能干细胞状态。对于难以建立胚胎干细胞系的动物细胞无疑提供了一种可能的替代方案。  我们通过使用7个确定的因子(Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4, Lin28, Nanog SV40largeT),可以直接重新编程绵羊体细胞为多能性细胞。产生的绵羊iPS细胞为碱性磷酸酶阳性,同时表达胚胎干细胞标记物,包括Oct3/4,Nanog,Sox2,REX1,SSEA-1,Tra-1-60,TRA-1-81和CDH1。此外,绵羊的iPS细胞具有正常的核型,在拟胚体和畸胎瘤实验中能够分化为所有三种胚层。我们的研究将有助于揭示绵羊多能性干细胞的性质,并提供可用来筛选绵羊ES细胞培养条件的系统。此外,可以直接使用绵羊iPS细胞产生精确的基因改造绵羊。
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