我国菜籽粕资源丰富,具有粗蛋白含量丰富、氨基酸含量均衡等优点,作为植物蛋白饲料具有很高的应用潜力。但是由于菜籽粕中各种抗营养因子的存在,导致菜籽粕的饲用价值很大程度上受到了限制。本论文筛选获得用于菜籽粕发酵的高效益生菌菌株并将益生菌混合联合发酵菜籽粕改善菜籽粕的品质。本文利用硫苷筛选培养基从菜籽粕发酵青贮等来源分离得到47株菌株。以对菜籽粕主要抗营养因子硫苷的降解能力以及产蛋白酶活力为指标,筛选获得高效用于菜籽粕发酵的2株益生菌菌株Y8和GYB6。通过形态学特征、生理生化特征和16S r DNA序列分析,鉴定两株菌为分别解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。将枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌以及实验室保藏的6株益生菌进行单菌发酵菜籽粕,以硫苷降解率X(%)、肽增长率Y(%)、单宁降解率Z(%)、植酸降解率M(%)、粗纤维降解率W(%)为评价指标,采用加权法以N为综合评价指标(其中N=0.5×X+0.2×Y+0.1×Z+0.1×M+0.1×W)。结果显示经解淀粉芽孢杆菌对菜籽粕硫苷降解率最高,为53.89%,并且发酵后的菜籽粕肽增加率也最高,为88.89%;酿酒酵母对菜籽粕的植酸和单宁降解率最高,分别为36.31%、23.01%;枯草芽孢杆菌对菜籽粕粗纤维降解率最高,为37.48%。根据各指标以及综合评价指标最终确定选择解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母进一步进行混菌发酵。为了确立三种菌之间协同增效发酵菜籽粕的方式,先采用两菌混合发酵的方式进行发酵。结果表明,枯草芽孢杆菌与酿酒酵母两菌采用混合一步发酵的方式,菜籽粕中硫苷降解率以及肽增长率最高,达到协同增效的效果。解淀粉芽孢杆菌与酿酒酵母和枯草芽孢杆菌进行分步发酵效果优于一步发酵。因此设计三菌组合发酵菜籽粕的方式为接种枯草芽孢杆菌与酿酒酵母先发酵,然后接种解淀粉芽孢杆菌发酵。首先确定三菌混合发酵的最佳菌种比,结果显示枯草芽孢杆菌:酿酒酵母:解淀粉芽孢杆菌最佳比例为2:3:1。通过单因素和正交试验,探究三种益生菌混菌固态发酵菜籽粕的最佳发酵温度、料水比、发酵时间以及接种量,确定混菌固态发酵菜籽粕的最佳工艺。结果表明枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌混菌固态发酵菜籽粕的最佳条件为:接种量为30%,发酵温度为37℃,料水比为1:1.2,发酵时间为先接种枯草芽孢杆菌与酿酒酵母发酵48 h后再接种解淀粉芽孢杆菌发酵48 h。对菜籽粕发酵前后的营养成分、抗营养因子成分、益生菌菌数以及感官指标等进行了分析测定。经解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母混合发酵后的菜籽粕中粗蛋白含量由原来的33.16%提高至38.56%,氨基酸含量增加了18.35%。经SDS-PAGE分析,菜籽粕中大分子蛋白被降解为小分子的蛋白,菜籽肽含量提升了近3倍。发酵后的菜籽粕主要抗营养因子硫苷降解率达99.04%,几乎完全降解。异硫氰酸酯以及噁唑烷硫酮的量也大幅度降低,降解率分别为71.32%和83.87%。其他抗营养因子单宁、植酸、粗纤维降解率分别为30.24%、43.09%、39.73%。发酵菜籽粕中益生菌菌数为3.84×10~8CFU/g。菜籽粕的品质得到了很大的提高。