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敲低DNA-PKcs或抑制其激酶活性，研究DNA-PKcs对SIK2蛋白的稳定性调节作用。体外纯化SIK2蛋白，检测DNA-PKcs对SIK2的磷酸化调节作用，进一步明确DNA-PKcs磷酸化SIK2的位点及调节机制。 敲低DNA-PKcs或抑制其激酶活性，首先观察SIK2蛋白的变化；然后细胞经放线菌酮CHX处理后，Western blot检测DNA-PKcs对SIK2蛋白的半寿期影响。利用免疫共沉淀技术处理DNA-PKcs敲低细胞（或抑制其激酶活性），检测DNA-PKcs对SIK2蛋白泛素化降解的影响。构建His标签的SIK2重组质粒，导入BL21感受态细胞中原核诱导SIK2蛋白表达，并且进行体外纯化。建立体外磷酸化反应体系，研究DNA-PKcs对SIK2的体外磷酸化调节作用，并通过质谱分析检测SIK2自磷酸化和磷酸化位点。用32P标记DNA，EMSA电泳检测SIK2能否结合DNA，并检测DNA-PKcs对SIK2结合DNA是否有调节作用。 Western blot结果显示，敲低或抑制 DNA-PKcs，SIK2的表达量下降;放线菌酮 CHX处理DNA-PKcs敲低细胞（或抑制其激酶活性），SIK2蛋白的半寿期缩短。免疫共沉淀结果显示，敲低或抑制DNA-PKcs的激酶活性，SIK2蛋白的泛素化程度明显增强。原核诱导表达结果显示，成功构建His标签SIK2重组质粒，并在体外诱导表达，且纯化出SIK2蛋白。体外磷酸化反应结果显示，SIK2可以发生自磷酸化，DNA-PKcs可以磷酸化SIK2，且SIK2抑制DNA-PKcs的自磷酸化；质谱分析确定SIK2的S358、S515、S534位点发生自磷酸化和DNA-PKcs在S512、S515、S534位点磷酸化SIK2。DNA Binding实验结果显示，SIK2可以结合DNA，且DNA-PKcs可以增强SIK2对DNA的结合；DNA-PKcs也可以结合DNA，而SIK2却抑制DNA-PKcs与 DNA的结合。 实验发现DNA-PKcs可以调节SIK2的稳定性，敲低或抑制其激酶活性，SIK2的表达量降低并且半寿期缩短，泛素化降解增强。SIK2可以自磷酸化，其自磷酸化位点为S358、S515、S534；DNA-PKcs可以磷酸化SIK2，其磷酸化位点为S512、S515、S534。DNA-PKcs可以发生磷酸化，且SIK2抑制其自磷酸化。SIK2可以结合DNA，并且DNA-PKcs能够增强SIK2与DNA的结合。DNA-PKcs可以结合DNA，但是SIK2抑制DNA-PKcs与 DNA的结合。