目的:观察固金消瘤汤治疗Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌脾虚痰湿型患者的临床疗效,实验研究固金消瘤汤的抑瘤功效及其作用机制,为固金消瘤汤的应用提供临床及实验依据。方法:1.60例Ⅲ、Ⅳ期非小细胞肺癌脾虚痰湿型患者,随机分为中医组、西医组及中西医结合组,每组各20例。中医组予固金消瘤汤(Gujin Xiaoliu Tang,GJXLT),西医组予单纯化疗,中西医结合组予固金消瘤汤联合化疗。观察两周期化疗疗程,每周期化疗前后记录患者的中医症状、血液生化、卡氏评分、肿瘤大小等情况,并进行统计分析。2.按标准方法制备GJXLT含药血清、GJXLT含药血清冻干粉及GJXLT冻干粉,分别作用于人肺腺癌A549细胞模型,MTT比色法检测细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI染色的荧光显微镜检和流式细胞术研究GJXLT冻干粉对人A549细胞的促凋亡作用,Western blot免疫印迹法探讨GJXLT对JAK2/STAT3信号通路STAT3、p-STAT3及下游蛋白VEGF表达的影响。3.腋窝皮下注射A549细胞悬液以建立BALB/c-nu小鼠移植瘤模型。称取小鼠体质量,随机分为模型组、顺铂组、中药低剂量组、中药中剂量组及中药高剂量组。小鼠每日给药1次,连续给药3周,给药方案为:模型组予生理盐水灌胃和腹腔注射;顺铂组予生理盐水灌胃,同时予顺铂2 mg/(kg·d)腹腔注射;中药低、中、高剂量组组分别予0.5g/mL、lg/mL、2g/mLGJXLT灌胃,并予生理盐水腹腔注射。给药期间观察小鼠生活状况,定期测量小鼠移植瘤外观体积。给药结束后称取小鼠体质量,处死小鼠后剥离移植瘤,收集小鼠血液。游标卡尺测量剥离瘤体积,DAB免疫组化法测定移植瘤Ki-67核蛋白表达,TUNEL荧光免疫组化法检测移植瘤细胞凋亡情况,全自动临床生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)含量,全自动电化学发光自动仪检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,三分类血细胞分析仪检测红细胞(RBC)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)计数,镜下观察检小鼠肝、肾组织形态学改变。成果:1.①临床实验完成病例数35例,中医组(A组)8例,中西医组12例(B组),西医组15例(C组),各组病人年龄、性别及实验前卡氏评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组病人病程、病理分型及临床分期比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②治疗结束时,B组肿瘤稳定例数高于A组与C组,与A组比较差异有统计学意义(P=0.019)。③治疗结束后,A组、B组卡氏评分有升高趋势(P分别为0.7425、0.0947);C组治疗后卡氏评分有降低趋势(P=0.4025);治疗结束后中西医组卡氏评分优于中医组与西医组,与西医组比较差异有统计学意义(P=0.049)。④治疗结束后,B组在咳嗽、气急、胸痛症状的缓解方面比C组有更好的疗效,差异均有统计学意义(P<0.05),三组患者在痰血、咯痰、发热、食欲不振、舌质舌苔、脉象的方面虽有一定程度的缓解,但3组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。⑤治疗结束后,A组、B组及C组Ⅲ、I度血红蛋白及血小板减少病例数差异均无统计学意义(P>0.05);A组Ⅲ、Ⅳ度白细胞减少病例数较C组少,差异有统计学意义(P=0.047)。2.①GJXLT含药血清作用于A549细胞48h后,整体抑制率为11.57%(P=0.0001<0.01);与对应浓度的空白血清比较,20%、30%含药血清组A549细胞的抑制率分别为16.34%(P=0.0006<0.01)与 19.72%(P=0.0096<0.01);②GJXLT含药血清冻干粉作用于A549细胞72h后,整体抑制率为22.58%(PP=0.0178<0.01),与对应浓度的空白血清冻干粉比较,6.250%、100%含药血清冻干粉对A549细胞的抑制率分别为24.51%(P=0.0062<0.01)与43.72%(P=0.0489<0.01);③GJXLT冻干粉作用于A549细胞 12h、24 h及36h后,与溶剂对照组比较,除12h及24h的GJXLT(8.88ug/ml)组外,各时间点各浓度GJXLT冻干粉均能抑制A549细胞的增殖(P<0.05),且抑制率具有时间和浓度依赖性;④倒置荧光显微镜下观察,与溶剂对照组相比,GJXLT冻干粉作用A549细胞24h后,早期凋亡及晚期凋亡细胞数越多,浓度越大,早期及晚期凋亡细胞数越多;经流式细胞仪分析,与溶剂对照组相比,早期凋亡率及晚期凋亡率均有统计学差异(F=0.385;P=0.0156),两两比较,GJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学差异(P<0.05);⑤Western blotting蛋白印迹法检测结果表明,GJXLT冻干粉作用于A549细胞24h后,与溶剂对照组相比,GJXLT(100ug/mL)组P-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05),余GJXLT浓度组P-STAT3蛋白表达有降低趋势(P>0.05),呈剂量依赖性效应;与溶剂对照组组比较,GJXLT(100ug/mL)与GJXLT(50ug/mL)VEGF蛋白表达明显降低(P<0.05),GJXLT(25ug/mmL)VEGF蛋白表达有降低趋势,呈剂量依赖性效应。各组STAT 3总蛋白表达无明显差异(P>0.05)。3.①给药1周后,模型组小鼠移植瘤体积随时间呈指数式增长、曲线陡直,顺铂组与GJXLT低、中、高剂量组肿瘤生长相对缓慢,曲线较模型组低平;给药结束时与模型组比较,顺铂组及GJXLT中、高剂量组小鼠移植瘤体积明显较小(P<0.05);与顺铂组比较,GJXLT中、高剂量组小鼠移植瘤体积无明显差异(P>0.05)。②给药结束后与模型组比较,顺铂组及GJXLT中、高剂量组剥离瘤体积明显较小(P<0.01);与顺铂组比较,GJXLT中、高剂量组剥离瘤体积无明显差异(P>0.05);GJXLT中、高剂量组瘤体积抑制率分别为44.94%、50.87%,高于顺铂组的34.96%。③与空白对照组及顺铂组比较,GJXLT中、高剂量组剥离瘤组织Ki-67蛋白表达均较弱,阳性细胞率分别为(44.61 ±8.39)%及(29.94士3.41)%,均有统计学差异(P<0.05);GJXLT低、中、高剂量组间两两比较,部分具有统计学差异(P<0.05);④TUNEL细胞凋亡检测结果表明,镜下观察GJXLT组剥离瘤组织凋亡细胞比例较空白对照组及顺铂组高,且随GJXLT剂量的升高,染为棕色的细胞(即凋亡细胞)比例随之升高。⑤与模型组及顺铂组比较,GJXLT各剂量组裸鼠皮毛光泽,活动灵活,实验结束时体质增加,其中GJXLT高剂量组差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,顺铂组裸鼠皮毛欠光泽、反应迟钝、行动迟缓等毒副作用,实验结束时体重明显减轻(P<0.05)。⑥与模型组比较,顺铂组白细胞计数下降,差异有统计学意义(P<0.01),GJXLT各剂量组白细胞计数无显著下降(P>0.05);与模型组比较,顺铂组及GJXLT高剂量组血小板计数上升,差异有统计学意义(P<0.01);各组的红细胞计数均无显著性差异(P>0.05)。⑦与模型组比较,顺铂组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量升高,差异有统计学意义(P<0.05),GJXLT各剂量组ALT、AST、BUN及肌酐(Cr)水平无明显差异(P>0.05);与模型组比较,GJXLT中、高剂量组CK-MB水平较低(P<0.01)。⑧各组小鼠肝组织切片均未见炎性细胞浸润及坏死的病理表现,肝细胞、肝血窦、门管区组织结构大致正常。与模型组比较,顺铂组肝细胞胞质疏松淡染和气球样变,肝细胞轻度水肿,体积增大,排列稍显紊乱,部分肝窦受压和变窄,有肝细胞轻度变性的表现。⑨各组小鼠肾组织切片均未见炎性细胞浸润及坏死的病理表现,肾小球、肾小囊、肾小管等组织结构基本正常。结论:1.固金消瘤汤(GJXLT)配合化疗治疗Ⅲ、Ⅳ期NSCLC脾虚痰湿型患者,可减少化疗副反应的发生,具有提高肿瘤客观疗效、减轻临床症状及提高生存质量的作用,临床应用安全,值得推广。2.GJXLT冻干粉、GJXLT含药血清及其含药血清冻干粉能抑制A549细胞生长,且具有浓度和时间依赖性。3.GJXLT冻干粉能诱导A549细胞凋亡,可能具有浓度依赖性。4.GJXLT冻干粉可能通过降低p-STAT3及VEGF蛋白表达,抑制JAK2/STAT3信号通路来抑制A549细胞增殖和诱导细胞凋亡。5.GJXLT能通过抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡来抑制小鼠A549移植瘤的生长。6.GJXLT能改善A549移植瘤小鼠生存质量,无明显毒副作用。