论文部分内容阅读
目的:淫羊藿素是中药淫羊藿的主要活性成分,为类黄酮类化合物。研究证实淫羊藿素具有显著而广泛的抗肿瘤活性,对多系统来源的恶性肿瘤细胞均具有显著的抑制增殖、诱导凋亡的效应。已有的研究成果表明淫羊藿素的这一功能依赖于其对细胞内MAPK家族信号通路的激活。然而,在不同来源的恶性肿瘤细胞内,淫羊藿素对MAPK家族成员的激活作用各有不同,因此,我们推测MAPK并非淫羊藿素发挥抗肿瘤效应的第一作用靶点。活性氧类物质(ROS)是细胞内有氧代谢产生的一组功能活跃的小分子物质,经研究证实能够作为第二信使调节MAPK家族信号通路,且在不同来源的细胞系中对MAPK家族信号分子的调节作用具有异质性。据此,我们推测ROS可能是淫羊藿素发挥其抑制肿瘤细胞增殖的直接作用靶点。为探讨淫羊藿素发挥抗肿瘤效应的分子机制,检测淫羊藿素的细胞毒性作用是否依赖于MAPK上游调控分子活性氧类物质(ROS)的产生,我们以慢性髓系白血病细胞(K562细胞)和多发性骨髓瘤(U266细胞)为实验材料,设计一系列实验验证淫羊藿素通过激活ROS-JNK-c-jun发挥抑制不同来源血液肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的作用。材料与方法:以梯度浓度淫羊藿素(0、2、4、8、16、32μΜ)作用于K562细胞和U266细胞,处理24h、48h、72h后收集细胞,以流式细胞术检测胞内活性氧类物质水平。以活性氧类物质阻断剂N-乙酰-L-半胱氨酸与淫羊藿素联合处理细胞后,检测N-乙酰-L-半胱氨酸是否阻断淫羊藿素诱导活性氧类物质产生,同时检测细胞凋亡率和凋亡相关的分子标志,观察活性氧类物质阻断剂是否逆转淫羊藿素对肿瘤细胞诱导凋亡的作用。最后,以活性氧类物质阻断剂N-乙酰-L-半胱氨酸与淫羊藿素联合处理细胞并检测联合用药对活化的JNK-c-jun信号通路的影响。结果:1.淫羊藿素诱导胞内活性氧类物质的产生,且该效应具有浓度依赖性。2.抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸能够有效降低细胞内淫羊藿素诱导产生的活性氧类水平。3.抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸降低细胞内活性氧类水平后,细胞凋亡率较淫羊藿素单独处理细胞时降低,凋亡相关蛋白质分子表达量降低。4.淫羊藿素促进细胞内Nox4基因的表达。5.抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸联合淫羊藿素处理细胞,JNK-c-jun通路的信号分子JNK及c-jun磷酸化水平较淫羊藿素单独处理细胞时降低。结论:1.淫羊藿素浓度依赖性地诱导胞内活性氧类物质的产生,与其抑制肿瘤细胞增殖效应一致。2.阻断细胞内活性氧类物质产生能够逆转淫羊藿素对肿瘤细胞增殖的抑制作用,表明淫羊藿素抑制肿瘤细胞增殖效应依赖于其诱导细胞内活性氧类物质的产生。3.阻断细胞内活性氧类物质产生能够逆转淫羊藿素对JNK-c-jun通路的激活效应,表明ROS-JNK-c-jun通路是淫羊藿素在不同血液肿瘤细胞内发挥其抑制增殖效应的共同通路。