对虾白斑综合症病毒感染相关分子的筛选

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对虾为水产养殖产业中的重要经济品种,每年为人们带来大量的海鲜食材并创造了巨大的经济效益。但近年来不断的病害尤其是对虾白斑综合症病毒(Whitespot syndrome virus,WSSV)导致对虾大量减产,造成的直接或间接的经济损失十分巨大。研究对虾先天性免疫机制对于对虾抗病害十分重要。  本实验室收集了365种对细胞信号转导分子具有调节功能的化合物,在高等哺乳类如人和小鼠细胞中已经通过使用这些化合物对其靶基因激活/抑制即控制信号通路的开关来研究信号通路的功能。本实验室在此方法基础上,分离螯虾造血组织并使用胶原酶制备单细胞悬液,将这些化合物处理细胞并人工感染WSSV病毒粒子,提取螯虾造血干细胞总RNA并反转录得到cDNA进行Real-TimePCR,以螯虾40S核糖体小亚基片段作为内参基因,通过分析WSSV极早期基因ie1的转录水平来判断化合物处理后能够促进WSSV基因转录还是抑制其转录,最终实现筛选出具有抗病原微生物功能的信号通路。  经过两轮筛选实验,我们从365种对细胞信号转导分子具有调节功能的化合物中筛选出55种能够影响WSSV基因转录的化合物,其中17种能够促进病毒基因ie1转录,38种能够抑制其转录。随后,通过细胞毒性实验对55种化合物对细胞的毒性作用进行分析,以期排除因化合物本身对细胞的毒性作用而产生的影响。  本研究初步筛选出部分能够影响WSSV基因ie1转录的化合物,并对其在靶信号通路中的作用机制尝试阐明。该论文为抗病原微生物信号通路的研究以及对虾免疫的探究奠定了基础。
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