研究背景:脉络膜新生血管(choroidal neovascularization, CNV)生成是许多致盲性眼底病晚期共有的病理改变。目前临床上治疗CNV的方法主要有激光光凝术、PDT、TTT、手术切除新生血管膜或黄斑转位及放射治疗等,但上述方法均有不足之处。随着人们对CNV生成机制认识的深入,新生血管抑制剂已成为近年来治疗CNV相关疾病的研究热点。糖皮质激素(如地塞米松和曲安奈德)为外源性新生血管抑制剂,已用于CNV相关疾病的治疗。然而,由于眼球壁的阻挡和血-视网膜屏障等因素的存在,糖皮质激素经大剂量系统给药后方能达到治疗效果,但极易引起全身性毒副作用;局部滴眼效果差,且很难到达眼后节。同时,由于药物在玻璃体内的半衰期较短、代谢速度过快、以及患者个体差异较大等原因,玻璃体内注射需多次给药后方可维持有效治疗浓度,且易引起青光眼、白内障、玻璃体出血、视网膜脱离及眼内炎等并发症,因而限制了它在眼后节疾病方面的应用。因此,研制一种既有利于治疗而毒副作用降至最低限度的糖皮质激素给药体系是最为理想的方法之一。理想的控释制剂应该是以一种持续的方式释药,并超越所需要的时间期限。目前,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide), PLGA]为材料制成的控释给药系统如植入体、微球及纳米粒等已获得广泛应用。采用具有生物降解性PLGA合成的纳米给药系统可控制药物的释放速率和机体靶向性给药,从而最佳优化药物的治疗效果、减少毒副反应以及消除重复注射所致的并发症。PLGA具有良好的生物相容性,更重要的是其降解速率和药物的释放可通过聚合体的物理化学性质如分子量、亲水性和丙交酯与乙醇酸的比值来控制等。与较大的聚合物相比,它的优势在于不仅可以免除植入和取出时所需的手术操作,而且其降解作用的时间范围可从数月至数年。目的:探讨玻璃体内注射醋酸地塞米松(dexamethasone acetate, DA)-PLGA纳米粒对实验性脉络膜新生血管(choroidal neovascularization, CNV)的抑制效果,并评价其在不同眼组织内的释药模式。方法:采用改良的乳化/溶剂蒸发法制备载药量为50%的DA-PLGA纳米粒。雄性BN大鼠180只,每只动物选取一只眼作为实验眼,采用激光光凝法建立CNV模型,对侧眼未处理。随机将实验眼分7组,即50μg、100μg、200μg和400μg DA-PLGA纳米粒组(各30只)、100μg DA组(30只)、空白PLGA纳米粒组(15只)和生理盐水对照组(15只)。各组分别给予玻璃体内注射的剂量为10μL。光凝后各个时间点行临床检查及眼底照相以观察药物在玻璃体内的消退时间。于光凝后1、3、7、14、21、28和56d,采用反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography, RP-HPLC)检测各组大鼠眼角膜、虹膜、玻璃体和脉络膜视网膜组织内DA的药物浓度。各组于激光前和光凝后第7、14、21、28和56d行闪光视网膜电图检查(flash-electroretinography, F-ERG)评估视网膜功能。光凝后14d和56d,通过荧光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography, FFA)观察CNV的生成率;之后处死动物,摘除眼球制作标本,进行光学显微镜和透射电子显微镜观察。结果:光凝后1d,临床检查发现DA-PLGA纳米粒、空白PLGA纳米粒和DA玻璃体内注射后均可引起明显的玻璃体混浊,之后药物逐渐吸收并沉积在玻璃体腔下方。DA组消退较迅速,至光凝后14d时药物基本完全吸收,玻璃体间质变清;PLGA纳米粒组消退非常缓慢,至光凝后56d时在玻璃体腔偏下方仍可见少量残留的药物团块。DA-PLGA纳米粒在实验眼玻璃体和脉络膜视网膜组织中的释药模式呈“3相”,即初始突释、稳态释药和再次突释,持续释药时间至少56d。DA原药的释药模式呈“单相”,释药时间为14d左右。在实验全过程中,角膜组织内始终未检测到DA,而虹膜组织仅在给药后第1d测得较低浓度的DA。F-ERG检查显示各组在激光前和激光后不同时间点a波和b波的振幅值和峰时值无明显差异(P>0.05)。光凝后14d和56d,50μg、100μg、200μg和400μg DA-PLGA纳米粒组、DA组、空白PLGA纳米粒组和生理盐水对照组CNV的生成率分别为47.4%/46.2%、28.2%/25.0%、15.8%/15.0%、7.9%/7.7%、31.6%/35%、65.8%/64.1%和65.8%/65.0%。所有DA-PLGA纳米粒组和DA组CNV的生成率较空白PLGA纳米粒组和生理盐水对照组明显降低(P<0.01,χ~2分割法),但各治疗组内无明显差异(P>0.05)。其中,400μgDA-PLGA纳米粒组CNV的生成率明显低于50μg和100μgDA-PLGA纳米粒组(P<0.05)。光凝后56d,DA组中部分原来无荧光素渗漏的光凝斑又重新出现荧光素渗漏。光凝后56d,光凝区纤维血管组织增生(fibrovascular proliferation, FVP)的平均厚度在50μg、100μg、200μg和400μg DA-PLGA纳米粒组、DA组、空白PLGA纳米粒组和生理盐水对照组中分别为84.77±9.79μm、69.52±10.52μm、53.17±13.83μm、38.39±7.87μm、70.49±12.39μm、103.86±16.36μm和105.11±13.70μm。所有DA-PLGA纳米粒组和DA组FVP的平均厚度较空白PLGA纳米粒组和生理盐水对照组显著变薄(P<0.01,SNK-q检验)。不同剂量DA-PLGA纳米粒组组间两两比较均有显著性差异(P<0.05)。透射电子显微镜检查发现,光凝后14d,400μgDA-PLGA纳米粒组和DA组的RPE层紊乱、外节膜盘结构模糊,视网膜节细胞层和神经纤维层的线粒体明显空泡化,内质网肿胀,高尔基复合体排列紊乱,微管肿胀及微丝排列紊乱。至光凝后56d,400μgDA-PLGA纳米粒组RPE层、外节膜盘、视网膜节细胞层和神经纤维层的超微结构基本恢复正常,而DA组未见明显改变。50μg、100μg、200μgDA-PLGA纳米粒组的RPE层、外节膜盘、内外核层及内外丛状层的超微结构均无明显异常。结论:玻璃体内注射DA-PLGA纳米粒可呈剂量依赖性地抑制实验性CNV的生长。与DA原药相比,DA-PLGA纳米粒具有毒性低、缓释及药效持久等特性,有可能成为治疗CNV相关疾病的理想手段之一。