家蚕杆状病毒表面展示猪瘟病毒E0、E2蛋白及各自免疫原性分析

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猪瘟(Classical swine fever, CSF)是当今威胁养猪业的一个重要因素,而猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)是导致猪瘟的唯一因素,因而制造针对猪瘟病毒的新型疫苗具有重要的实用价值。猪瘟病毒有两个重要结构蛋白:囊膜蛋白E0和E2,是猪瘟病毒的主要保护性抗原,能够诱导机体产生保护性抗体,在猪瘟病毒的传播中具有关键性作用。因而,这两个蛋白可作为制造新型疫苗的抗原靶。家蚕杆状病毒表面展示技术是近年来发展起来的一种新型的真核表达外源蛋白的方法。将外源基因与BmNPV GP64基因融合表达可产生表面展示外源蛋白的病毒粒子。将该病毒粒子纯化,即可作为免疫原对动物进行保护性免疫,此方法可简化疫苗生产的纯化工艺。利用家蚕蛹作为生物反应器可实现规模化生产,降低疫苗制备的成本。本研究通过克隆猪瘟病毒E0基因和E2基因,将两基因分别构建到原核表达载体上,在大肠杆菌中表达目的蛋白,并制备出多克隆抗体。同时将两基因分别插入到经过改造的pFastBac1质粒的GP64信号肽(SP)和跨膜区(TM)之间,成功构建重组pFastBac1-SP-E0-TM质粒和pFastBac1-SP-E2-TM质粒,利用Bac-to-Bac转座重组获得重组杆状病毒BmNPV-E0和BmNPV-E2。将这两种病毒以中等感染复数接种家蚕蛹制备并纯化重组病毒粒子,而后免疫Balb/c小鼠制备血清抗体,通过ELISA检测抗体效价可达到1:800(BmNPV-E0)和1:1600(BmNPV-E2),表明所获得的两种重组病毒均具有良好的免疫原性。本研究表明利用家蚕蛹作为生物反应器,可有效表达猪瘟病毒E0和E2囊膜蛋白于BmNPV病毒表面,这样的重组BmNPV粒子具有良好的免疫原性,预示利用家蚕杆状病毒表面展示技术开发新型猪瘟疫苗具有良好的发展前景。
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