背景：T 细胞免疫球蛋白及粘蛋白家族-3（Tim3）作为Tim 家族的成员，有281个氨基酸组成，最先被发现特异的表达在CD4+Th1 细胞上，而不在Th2 细胞上表达。这个发现促使人们去研究Tim3是如何调节Th1 型细胞反应，又是如何在自身免疫性疾病中发挥作用？ Tim-3分子通过负性调节Th1 细胞的功能广泛参与了特异性免疫应答的调节。近期研究发现，Tim-3 在DC、单核细胞、巨噬细胞等天然免疫细胞表面也有表达，通过激活炎症细胞发挥促炎症作用。　　 目的：探讨Tim-3 对巨噬细胞功能的调节作用及其机制。　　 方法：（1）首先将含Tim-3SiRNA及NC 对照序列的载体经脂质体分别转染细胞系RAW264.7，以G418 加压筛选，通过RNA 干扰降低Tim3 在巨噬细胞表面的表达，构建了一种稳定低表达Tim3的RAW264.7 巨噬细胞系。以野生型及低表达Tim3的巨噬细胞为研究对象，探讨Tim-3 对巨噬细胞活性及表型的影响。（2）体外阻断或激活Tim3通路，ELISA法检测巨噬细胞等天然免疫细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-6的水平；通过Western blot 方法检测炎症反应信号通路中关键分子AKT、PAKT、NF-kB的变化；通过ELISA法、Western blot 检测Tim-3 与模式识别受体TLR4的相互作用。双荧光素酶报告基因系统检测NF-kB的活性。通过以上方法检测Tim3 参与巨噬细胞炎症反应的机制。(3)建立败血症动物模型，观察Tim3 在败血症早期和晚期的不同作用。(4)以败血症小鼠模型为基础，Tim-3 体内阻断实验检测Th1、Th17 细胞活性，研究Tim-3 对Th1,Th17的分化的影响以及对小鼠腹腔巨噬细胞表面共刺激分子CD80、CD86的表达的影响。同时体外实验检测Tim3 对巨噬细胞表面共刺激分子CD86/CD80表达比例的影响以及对Th1,Th17的分化的影响。从体内实验和体外实验两方面探讨Tim3 对巨噬细胞抗原呈递作用及对Th1,Th17 细胞极化的影响。　　 结果：（1）成功构建了重组载体Tim3-siRNA，建立了稳定低表达Tim3的巨噬细胞系。(2)为了探讨Tim-3 在天然免疫中的调节作用，我们观察了Tim-3 对巨噬细胞活性的影响，结果显示Tim-3 刺激巨噬细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-6。同时ELISA 结果显示Tim3 通路和TLR4 通路在刺激巨噬细胞释放炎性因子TNF-α方面存在相互拮抗效应。　　 Western blot 结果也显示Tim3 信号通路和TLR4 信号通路的相互拮抗关系涉及到对一些重要的信号分子的影响，如AKT活性过强抑制了NF-kB活性，从而抑制了LPS 介导的TNF-α的分泌。（3）体内实验结果显示，以败血症小鼠模型为基础，Tim-3 在败血症早期表达升高，发挥抗炎作用，而在败血症后期表达失调。（4）体内体外实验结果显示，Tim-3 在提高CD86，降低CD80，提高CD86/CD80的比例中发挥重要作用。同时Tim-3可以促进Th1及Th17 细胞的分化，表现为Th1 型细胞因子IFN-γ，以及Th17 型细胞因子IL-17表达的升高。　　 小结：（1）Tim3 通过促使巨噬细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-6 参与了天然免疫反应调节。（2）Tim3 通路和TLR4 信号通路在介导炎症反应方面存在相互拮抗效应。（3）Tim3参与了巨噬细胞表面CD80，CD86 共刺激分子的调节，Tim-3 通过提高CD86/CD80的比例促进Th1及Th17 细胞的分化。（4）本实验为认识Tim-3 在天然免疫和获得性免疫中的作用提供了新的机制，为Tim3 在巨噬细胞介导的免疫反应中的调节作用提供了新的理论依据。