毛竹MLE转座子转座活性的鉴定与分析

来源 :浙江农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wudouyuan
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转座子(TransposableElement,TEs),又称跳跃因子,是能够改变自身位置的一段DNA序列。Mariner-like转座子(简称MLE转座子)是一类在动物和植物中广泛存在的DNA转座子。本课题组在分离得到的具有完整转座酶结构的毛竹MLE转座子的基础上,1)采用酿酒酵母菌(Saccharomycescerevisiae)检测系统,鉴定其转座活性:将转座酶CDS序列,构建到酵母供体载体pAG413-gal上,将非自主MLE转座子,构建到酵母表达载体pWL89a上,然后将这两个重组载体共同转化酵母,经过选择性培养、诱导筛选后,对活性酵母菌液PCR检测,发现竹亚科的MLE转座子在酵母中也能转座,通过序列比对,发现其转座后并没产生转座足迹。2)采用植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)转基因表达系统,鉴定其在植物中活性表达:将非自主MLE转座子和转座酶全长构建到拟南芥表达载体PCAMBIA1304+上,然后转化到拟南芥中,筛选和鉴定转基因植物,实现MLE转座子在拟南芥中的表达。本研究以克隆到的毛竹MLE转座子全长为基础,应用酵母系统检测转座子转座活性,为进一步构建高活性的毛竹MLE转座子和开发MLE转座子的分子标签系统奠定基础;同时,拟南芥转基因表达的研究,为研究MLE转座子在植物基因组中插入的偏好性及遗传稳定性打下基础,将为大规模构建植物突变体库和研究基因功能提供新的工具,使竹亚科基因的分离与鉴定更加简单易行,加快竹亚科基因组学的研究进程。
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