目的:人表皮生长因子2（human epidermal growth factor receptor type2,HER2）是乳腺癌治疗的一个重要靶点,过度表达的HER2与乳腺癌的生长、转移、侵袭性以及预后密切相关。目前临床上用于确定HER2表达水平的方法都是基于活检的侵袭性检查技术,但并非所有病变都容易获得活检。此时放射性核素标记的HER2靶向分子影像探针和HER2靶向介导抗肿瘤药物可对HER2阳性乳腺癌的诊疗发挥重要作用。本实验探究⁹⁹Tc^m-HER2:V2-培美曲塞分子探针对人乳腺癌细胞的体外结合特性和体外抗癌治疗作用。方法:采用Fmoc/tBu多肽固相合成法合成HER2靶向亲合体HER2:V2,在N末端连接抗肿瘤药物培美曲塞,通过配体交换法对其C末端连接的4个氨基酸Gly-Gly-Gly-Cys-所形成的类似N3S结构的强螯合基团进行⁹⁹Tc^m标记。采用反向高效液相色谱仪法（RP-HPLC）及纸层析法测定⁹⁹Tc^m-HER2:V2-培美曲塞的放化纯及标记率。将该分子探针分别置于37℃人新鲜血清和生理盐水中进行孵育,测定该分子探针在两种介质中不同时间点的放化纯,以了解其体外稳定性。取对数生长期的HER2高表达MDA-MB-453细胞铺到2个24孔板中并设置为实验组和阻断组,实验中组加入相应浓度的分子探针,阻断组中加入相应浓度的⁹⁹Tc^m-ZHER2:V2-培美曲塞的同时加入过量未标记的ZHER2:V2-培美曲塞进行阻断,收集细胞沉淀后使用γ计数仪计数,按照未阻断组放射性计数（实验组）减去阻断组放射性计数的方法计算得到细胞结合的特异性放射性计数,通过Graphpad Prism 5软件计算平衡解离常数（dissociation constant,Kd）,评估该探针对MDA-MB-453细胞的结合亲和力。将处于对数生长期的HER2高表达人乳腺癌MDA-MB-453细胞及HER2低表达MDA-MB-231细胞分别接种于6孔板内,进行⁹⁹Tc^m-ZHER2:V2-培美曲塞细胞摄取、滞留、内化和阻断实验。细胞增殖抑制实验利用MTT法,测定HER2:V2-培美曲塞对HER2高表达人乳腺癌MDA-MB-453细胞及HER2低表达人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗增殖治疗作用。结果:分子探针⁹⁹Tc^m-HER2:V2-培美曲塞HPLC放射峰保留时间为12.608 min,标记20min后测定其放化纯为（97.45±0.83）%,放化纯较高。该分子探针在37℃水浴条件下的人新鲜血清和生理盐水中孵育8h内的放化纯均高于92%,稳定性良好。HER2高表达MDA-MB-453细胞对⁹⁹Tc^m-HER2:V2-培美曲塞的平衡解离常数Kd值为14.17nM。HER2高表达人乳腺癌MDA-MB-453细胞的摄取率随时间延长逐渐上升,在4h时刻达到高峰（13.90±2.23）%,且在各时间点的摄取率均高于HER2低表达MDA-MB-231细胞（t或t’=9.163-18.784,P=0.000-0.011）。该分子探针对MDA-MB-453细胞的滞留率呈缓慢下降趋势,从1h（82.62±1.72）%下降至8h仍为（63.43±1.08）%。HER2高表达人乳腺癌细胞MDA-MB-453细胞的内化率除6h外整体呈逐渐上升趋势,至8h可增长至（41.29±2.54）%显示该分子探针较长时间滞留于细胞内。HER2高表达人乳腺癌MDA-MB-453细胞在4h时,用过量的500倍及1000倍的未标记ZHER2:V2-培美曲塞对HER2进行阻断后的摄取率均明显下降,从原来的（13.90±2.23）%分别下降至500倍时（1.92±0.13）%、1000倍时（1.89±0.12）%（t=9.282,P=0.001;t=9.307,P=0.001）。MTT抗增殖实验结果显示不同浓度的HER2:V2-培美曲塞对HER2阳性MDA-MB-453细胞生长的抑制率均高于HER2低表达细胞MDA-MB-231细胞且具有统计学意义（t=2.922-8.836,P<0.05）。结论:⁹⁹Tc^m-HER2:V2-培美曲塞分子探针制备方法简单,放化纯较高,体外稳定性良好。体外细胞实验显示该分子探针能够与HER2高表达乳腺癌细胞靶向结合,摄取率高,滞留时间较长且对HER2高表达细胞生长有较好的抑制作用,有望成为新型诊疗一体化的HER2靶向分子探针。